小球藻提取物对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤解毒机制的研究

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本研究旨在考察小球藻水提取物(以下简称为CA)对CCl4所致大鼠急性肝损伤的保护作用及解毒作用的机制。本文采用AOAC规定的方法对CA中营养成分进行分析,结果表明,CA中含有高蛋白质(52.46%),高碳水化合物(36.27%),低脂肪(0.12%)。采用分光光度法对CA抗氧化活性进行测定,测定结果显示,CA中总多酚类物质含量为22.94±1.82 mg·g-1(n=3),DPPH·自由基清除反应EC50为20.08 mg·mL-1(n=3)。本文采用高效液相色谱法测定小球藻提取物中叶黄素含量,以Zorbax EclipseXDB-C18(150×4.6 mm i.d.,3.5μm)为固定相,甲醇-乙腈-水为流动相,利用梯度洗脱程序测定了CA中叶黄素的含量,检测波长446 nm,流速0.8mL·min-1,柱温室温。结果表明,叶黄素在5.0~50.0μg·mL-1的范围内,峰面积与浓度线性关系良好,A=2.362×105C-1.256×103(r=0.9999,n=6),方法的平均回收率为98.7%(RSD=1.4%,n=9)。急性毒性试验中,雌雄各半的ICR小鼠40只,随机分为4个剂量组,灌胃给药后,经7天观察,未见明显不良反应,也无一例死亡。急性毒性试验结果表明,CA的LD50>10 g·kg-1,按急性毒性分级,其应属实际无毒物质。CA对CCl4所致大鼠急性肝损伤保护作用研究中,将60只受试大鼠随机分为溶媒对照组、模型对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和阳性对照组6个组,给药组(10,5,2.5 g·kg-1),阳性对照组(0.3 g·kg-1水飞蓟素)灌胃,溶媒对照组、模型对照组按等体积溶剂灌胃,连续给药30天,给药第27天、第30天,除溶媒对照组给予等体积玉米油溶液外,其它各组均皮下给予CCl4油剂(50%CCl4玉米油溶液)2mL·kg-1。观察CA对CCl4所致急性肝损伤大鼠的肝功能、肝组织过氧化指标、肝解毒各阶段指标以及肝病理学的影响。实验结果表明,CA各给药组大鼠血清中ALT、AST、ALP、TC、TG、TL较模型组明显改善(P<0.05或P<0.01),肝组织中MDA、Ca2+含量显著降低(P<0.05或P<0.01),SOD、GSH-Px活性显著增强(P<0.05或P<0.01)。CYP450含量降低(P<0.05或P<0.01),CPR活性显著降低(P<0.05),CYP2E1表达减弱,GSH含量明显恢复(P<0.05),GST活性显著增强(P<0.05)。HE染色结果表明,给药高、中、低剂量组与模型组比较,肝组织损伤均有不同程度的减轻,灶状、坏死灶减少,范围减小,浊肿、气球样变及间质炎症减轻,其中高剂量组较中、低剂量组效果好。采用MTT法考察了CA对人肝癌HepG2细胞的作用。结果表明,CA对HepG2细胞体外增殖具有明显的抑制作用。
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