稻瘟菌激发子诱导水稻mRNA差异表达研究

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本研究以广东省稻瘟菌优势小种之一ZC13(菌株97-151a),和以CO39为背景的水稻抗稻瘟病近等基因系C101LAC(含Pi-1抗病基因)为材料,探讨稻瘟菌激发子—水稻互作的分子机理。采用液体培养基培养稻瘟病菌。菌丝经过多次反复冻融、机械破碎、高速离心机10000g离心、PM-10膜高压超滤等步骤,提取到稻瘟病菌粗激发子(CEF)。通过POD和PAL的活性检测表明,纯化物具有激发子的活性,并用浓硫酸—葸酮法和考马斯亮蓝G-250法对其中糖和蛋白含量进行了测定。以激发子粗提液和双蒸水分别处理水稻叶片,采用DD-PCR,通过PAG电泳和银染获得差异条带,然后对可能差异条带后进行回收、重扩增、纯化;用pMD18-T载体将其转化到大肠杆菌DH-5a中,选择阳性克隆测序并在GenBank数据库中比对分析。克隆得到5个可能差异片段,并对其进行比对。我们的研究结果初步显示,水稻与稻瘟病菌激发子互作过程中,激发子可能诱导了水稻中一些抗病相关基因的表达,对于水稻抗稻瘟病菌的具体机制,需要对以上差异片段对应的全长基因的克隆和研究才能得到揭示。
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