【摘 要】
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本实验以蝉拟青霉(Paecilomyses cicadae)的四个菌株即0106-1、0207-2、0305-3和0306-4为筛选材料.应用蝉拟青霉多糖反馈抑制原理构建了一个筛选模型,并用它筛选4株蝉拟青霉
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本实验以蝉拟青霉(Paecilomyses cicadae)的四个菌株即0106-1、0207-2、0305-3和0306-4为筛选材料.应用蝉拟青霉多糖反馈抑制原理构建了一个筛选模型,并用它筛选4株蝉拟青霉菌株,检出一株耐同源多糖反馈抑制最强、产多糖潜力最大的蝉拟青霉菌株0305-3,最后确定0305-3为实验材料,研究了提高其主要活性成分之一多糖(Polysaccharide)含量的培养条件、提取工艺和蝉拟青霉多糖的部分理化性质.通过大量的实验,结果表明:0305-3菌株的最佳发酵工艺是:于PDA斜面上,27℃,7d,活化3次;洗下孢子粉,制成浓度为10<7>个/ml的孢子悬液;以7％的量接入蔗糖2％、麦芽糖3％、蛋白胨2％、酵母膏3％、MgSO<,4>·7H<,2>O 0.1％、NH<,4>Cl 0.1％;装液量为20％的培养基中(注:蔗糖和麦芽糖在发酵的起始阶段先加50％,剩余的50％于发酵三天后加入);于pH 7,27℃,第1至3天在100rpm的转速下培养,之后将转速增至150rpm,整个发酵过程为7天,到发酵终点时0305-3菌株的生物量和多糖产量分别为31.87g/L和3.48g/L,分别比未优化培养基组分及培养条件前提高了3倍和1.76倍.0305-3多糖的最佳提取工艺条件是:以pH为5的蒸馏水为提取溶剂,于80℃水浴浸提60分钟后,离心,收集上清,加入3倍体积95％乙醇醇析20小时后再离心,收集沉淀,纯化得多糖3.68g/L,比未优化前提高了0.2g/L,同时缩短了提取时间,也减少了试剂的消耗.通过对蝉拟青霉多糖理化性质的研究,结果表明:多糖颗粒的大小对其溶解速度和溶液粘度有明显的影响,即颗粒越大溶解越快,溶液的粘度也越大;温度对其溶解速度和溶液粘度也有明显的影响,即温度越高溶解越快,而加热到80℃后再回复至室温的多糖溶液的粘度最大,加温过高其粘度会有所下降;多糖溶液的粘度随着多糖溶液浓度的增加而大幅度上升;无机盐对多糖溶液的影响极大,当加入量达0.4％时其粘度就大幅下降;但多糖溶液的粘度随放置时间的延长并不会下降,比较稳定.
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