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闭合蛋白Claudins、咬合蛋白occlaudins以及连接黏附分子(junction adhesion molecule,JAM)等蛋白组成了细胞的紧密连接结构,广泛存在于上皮细胞上,此结构是细胞之间的连接方式。其中Claudin-2蛋白是Claudins蛋白家族中重要的一员,它的结构包括四个跨膜结构域以及两个胞外大小不一的环状结构。相邻细胞间的环状结构可以互相结合形成细胞间开放性或封闭性通道,同时可与其他紧密连接成分组成复合体维持细胞的紧密连接以及形成细胞旁通道的功能。研究表明Claudin-2与肿瘤细胞的转移与增殖、炎症的发生、病毒细菌的侵染有关。已有的研究表明一些病毒感染会改变了 Claudin-2的表达,从而破坏了细胞紧密连接结构,进而影响病毒对细胞的侵染,而目前有关Claudin-2的研究主要集中在哺乳动物病毒的细胞感染方面。家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosisvirus,BmCPV)主要特异性地侵染家蚕中肠上皮细胞,引起家蚕中肠型脓病。已有研究表明紧密连接蛋白Zo-1(Zonula occludens-1)参与BmCPV的细胞感染,为了进一步探讨细胞的紧密连接结构在BmCPV感染细胞中的作用,本研究以家蚕 Claudin-2(家蚕跨膜蛋白 47,Bombyx mori transmembrane protein 47,LOC101736066)为对象,探讨其在BmCPV感染细胞中功能,期望在探明家蚕Claudin-2蛋白功能的基础上,进一步丰富对BmCPV入侵细胞机制的理解,为家蚕中肠型脓病的防治提供了新的分子治疗靶点。Claudin-2 的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为 615 bp,编码 204 个氨基酸残基,它具有Claudins家族蛋白的典型的4个跨膜结构域。Claudin-2在家蚕不同组织的表达水平存在明显差异,以气管丛中的相对表达丰度最高,次之为卵巢,接着为中肠、头、表皮、丝腺,在脂肪体、马氏管、精巢中相对表达丰度最低;Claudin-2在中肠组织中的表达水平因发育时期不同而不同,说明BmCPV对于家蚕中肠组织的特异性侵染与Claudin-2的表达无关联;细胞免疫荧光结果显示,在BmCPV感染细胞过程中Claudin-2与BmCPV存在互作;Co-IP和酵母双杂结果显示,Claudin-2可与BmCPV的VP7蛋白存在互作,但没有检测到Claudin-2与病毒蛋白VP3的互作,推测Claudin-2可能通过与BmCPV VP7的互作参与细胞侵染过程。连接黏附因子A((junction aladhesion molecule-A,JAM-A)是哺乳动物呼肠孤病毒侵染细胞的受体,在侵染过程中病毒蛋白δ1与JAM-1蛋白结合,由Integrinβ1通过网格蛋白介导的内吞途径内化进入细胞;呼肠孤病毒可以与Claudin-2互作,通过冗余途径侵染细胞,那么为了明确家蚕中Claudin-2在BmCPV感染中的功能,研究了调节Claudin-2水平、抗体封闭Claudin-2对BmCPV感染细胞的影响,结果显示增加细胞Claudin-2的表达水平可以增加细胞对BmCPV的感染性,反之通过RNAi敲降Claudin-2的表达,细胞对BmCPV的感染性随之下降;同样用抗体封闭Claudin-2后,细胞对BmCPV的感染性呈现下降。这些结果表明Claudin-2对BmCPV感染细胞有促进作用,BmCPV侵染细胞可能也存在冗余途径。