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目的:乳腺癌是女性常见恶性肿瘤,近年来发病率逐年上升,已跃居女性恶性肿瘤的第一位。手术切除辅以术后化疗和内分泌治疗是乳腺癌治疗的主要方法。近年来,乳腺癌的分子机制研究和治疗取得了巨大进展,但乳腺癌仍然严重危害女性的生命及生活质量,其中肿瘤局部扩散、淋巴结转移和远处脏器转移是影响患者预后和限制生存率的主要原因。深入研究乳腺癌的分子发病机制,探索浸润、转移的机制,寻找新的抗癌策略,可以为乳腺癌患者尤其是缺乏有效治疗的患者提供新的靶向治疗,有效提高病人预后及生存率。Nek9是Nek家族成员之一,Nek9在中心粒复制、分离和纺锤体的形成等细胞周期过程中起重要作用,Nek9的异常表达也可以引起胞质的异常分裂及同源染色体的错误分离,目前为止,关于Nek9的相关研究,尤其是其在肿瘤中作用的报道甚少。本研究拟检测Nek9在乳腺癌及常见良性乳腺疾病中的表达情况,研究其在乳腺癌发生发展中的作用,并初步探讨其作用机制。方法:收集乳腺癌及常见良性乳腺病变标本,并完善相关临床病理资料。采用免疫组化方法检测浸润性乳腺癌及正常乳腺组织、乳腺增生、纤维腺瘤、导管内癌中NEK9蛋白的表达情况,比较同一病例浸润性癌与导管上皮增生、导管内癌、浸润癌以及淋巴结内转移癌之间的表达差异,并分析NEK9表达水平与临床病理指标的之间的关系。分别将siRNA和含Nek9的质粒瞬时转染进激素受体阳性乳腺癌MCF-7细胞系,将含Nek9的质粒转染进三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468,Western blot检测Nek9的干扰效率和过表达效率。EdU实验检测转染前后肿瘤细胞增殖能力的变化;迁移与浸润实验观察Nek9对肿瘤细胞迁移浸润能力的影响;通过流式细胞技术检测Nek9对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果:在316例浸润性导管癌中,NEK9的表达与组织学级别(p<0.0001)、肿瘤大小(p=0.0087)、HER-2扩增(p=0.0016)、p53 突变(p<0.000l)、ki67 高表达(p=0.0020)显著相关;与ER、PR表达呈负相关,结果有统计学意义(p<0.0001);三阴性乳腺癌中NEK9表达降低或缺失明显高于其他分子亚型(p<0.0001)。我们发现激素受体阳性乳腺癌中,导管内癌、浸润性癌、腋窝淋巴结转移癌中NEK9表达依次降低(p<0.0001),但导管内癌与导乳腺增生之间NEK9表达没有差异。体外实验中证实沉默Nek9可以促进细胞增殖、迁移和浸润,抑制凋亡,同时导致处于G2和M期的肿瘤细胞增多,同样的,将Nek9的质粒瞬时转染进乳腺癌细胞系中,细胞的迁移浸润能力受到抑制,细胞增殖能力下降,促进细胞凋亡,同时处于G2和M期的细胞减少,影响细胞周期过程。结论:1.在乳腺浸润性导管癌中,NEK9的表达与肿瘤大小、组织学级别、HER-2扩增、p53功能失常、高增殖指数呈负相关,与ER、PR的表达水平呈正相关。2.NEK9表达降低或缺失多见于三阴性乳腺癌,细胞实验亦显示封闭Nek9促进三阴性乳腺癌肿瘤细胞生长,Nek9或参与了三阴性乳腺癌的发病。3.同一病例中,从导管内癌到浸润性导管癌到腋窝淋巴结转移,NEK9的表达逐步下降,体外实验也证实干扰Nek9可促进乳腺癌细胞迁移和浸润,提示Nek9在乳腺癌的侵袭转移中发挥重要作用。4.NEK9表达异常可能通过抑制细胞凋亡、细胞周期G2/M检测点失控,从而促进细胞增殖,参与三阴性乳腺癌的发生,并在乳腺癌的浸润、转移过程中发挥作用。5.NEK9有望成为新的生物标记物,帮助发现新的乳腺癌分子亚型,为乳腺癌的诊断、治疗、预后提供新的研究依据。