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目的:心脑血管疾病已成为威胁人类生命的重要疾病之一。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的增生和迁移,是许多心脑血管疾病发生的重要因素之一。Rho/Rho激酶介导的信号转导通路参与了众多血管生理功能的调节,如细胞骨架重组,平滑肌收缩,细胞增生、黏附、迁移以及其他炎症反应过程,而这些细胞功能又与许多血管疾病的发生发展密切相关[1]。
本研究拟采用RNA干扰技术,对ROCK-I基因表达进行下调,研究ROCK-I基因与血管平滑肌细胞迁移的关系。为进一步研究Rho激酶与血管平滑肌细胞迁移的分子机制提供实验依据。
方法:根据大鼠ROCK-I基因参考序列设计合成siRNA,通过实验筛选出有效的siRNA,然后通过脂质体将ROCK-I的siRNA转入A7r5细胞,对于转染后的细胞进行如下实验:1.提取细胞的总RNA,然后做逆转录PCR,在基因水平上检测ROCK-I基因表达下调的情况 2.提取细胞总蛋白,通过蛋白印迹技术,在蛋白水平上检测ROCK-I基因表达下调情况 3.用Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验,测定ROCK-I基因表达下调前后细胞迁移率的影响。
结论:通过RNA干扰方法成功地使ROCK-I的基因表达下调,证实ROCK-I基因表达的下调可以抑制血管平滑肌细胞的迁移。这些研究为进一步探讨ROCK-I与血管平滑肌细胞迁移的分子机制提供了实验依据。