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随着畜牧业和养殖业的发展,对家禽和家畜食用饲料的营养要求越来越高。微生物饲料是以复合酶、微生物为生物饲料的发酵菌种,将原料转化成微生物活体益生菌、微生物菌体蛋白、复合酶制剂、生物活性肽类氨基酸等为一体的生物饲料。它是一种节粮促长、绿色环保、无公害的新型饲料。而利用现代生物学技术来生产微生物饲料,尤其是蛋白质饲料,是一种行之有效的方法。本研究以单细胞真核模式生物嗜热四膜虫为实验材料,对四膜虫细胞营养成分含量进行了测定,同时寻找一种新的培养基来培养四膜虫且对培养条件进行优化,并进行了大规模发酵培养,取得了以下三个方面的结果: (一)经测定嗜热四膜虫细胞中干物质、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、粗纤维、钙、总磷、氨基酸的种类及其含量和脂肪酸的种类及其含量等营养成分,结果显示四膜虫细胞中蛋白质含量高达70%,可作为一种高蛋白饲料。四膜虫细胞中含有18种氨基酸,其中必需氨基酸的种类高达7种,包括赖氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸和苯丙氨酸等,可以为动物补充自身不能合成的氨基酸。四膜虫细胞中脂肪酸种类多、必需脂肪酸含量高,如亚油酸和亚麻酸的含量很高。因此,嗜热四膜虫细胞中营养物质种类丰富、营养成分含量高、营养价值高,是一种很有潜力的微生物饲料。 (二)通过对培养基进行选择,找到了一种价格便宜的适宜嗜热四膜虫的经济型培养基,即GSPP培养基。与常规培养基SPP培养基相比,这种新的培养基便宜很多,SPP培养基的价格为72.6元/L,而GSPP的价格仅为2.2元/L,GSPP培养基的价格只有SPP培养基价格的1/33,大大节省了成本,适合大量培养四膜虫。用GSPP培养基来培养四膜虫,对培养条件进行了摇瓶水平的优化实验,得到最佳的发酵条件为:初始pH值为7.0、装液量为50%、起始接种密度为6250 cells/ml和转速为100 r/min。 (三)为了进一步提高嗜热四膜虫细胞的培养密度和干重,用GSPP培养基对其进行了发酵实验。当对四膜虫进行分批发酵时,最大细胞密度(MCC)达1.22×106 cells/ml,最大细胞干重达2.15 g/L;当对四膜虫进行恒速法补料分批发酵时,最大细胞密度可达1.85×106 cells/ml、最大细胞干重可达4.30 g/L;当对四膜虫进行一次性间歇法补料分批发酵时,最大细胞密度可达2.05×106cells/ml、最大细胞干重(MDW)可达4.40 g/L。实验结果显示,补料能显著提高细胞的密度和细胞干重,其中恒速补料发酵的MCC比分批发酵提高了51.27%,MDW提高了100.00%,一次性间歇补料发酵的MCC比分批发酵提高了67.97%,MDW提高了104.65%,说明一次性间歇补料比恒速补料密度和干重提高的都更明显。所以,对于嗜热四膜虫而言,一次性间歇补料是最佳的补料方式。 本研究结果显示,嗜热四膜虫是一种高营养价值的微生物饲料,可以给动物补充蛋白质,将为解决动物饲料短缺等问题提供一个新的方法。同时,本研究找到了一种价格便宜的培养基来培养四膜虫,并优化了新培养基的培养条件和建立了四膜虫的发酵技术,从而实现了四膜虫的经济、高密度、高效培养,为四膜虫发酵微生物饲料及工业化大规模培养奠定了基础。