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目的:建立一种可以检测多种病毒的、快速、高敏感度和高特异度的呼吸道病毒检测方法,本研究以呼吸道感染的儿童为研究对象,使用Seeplex多重RT-PCR和VRDAL多重巢氏PCR两种方法检测呼吸道病毒感染标本,并比较其结果,以更合适的检测方法全面的反映上海地区0-3岁儿童中病毒谱系的真实分布情况,揭示各种病毒感染的排序位次和占比。方法:征集上海地区2009年5月到2010年7月新华医院儿科呼吸道发热门诊0～3岁组患儿164例,以咽拭子对呼吸道分泌物采样,提取样本中病毒核酸,反转录合成cDNA。先使用VRDAL多重巢氏PCR方法扩增8种呼吸道病毒的目的基因,以琼脂糖凝胶电泳检测特异性产物条带,判定感染病毒。然后使用Seeplex(?) RV15 ACE Detection kit扩增15种呼吸道病毒的目的基因,经电泳后判定感染病毒,并比较两种多重PCR的结果,分析上海地区0-3岁组儿童呼吸道病毒感染的谱系特征,明确其优势病原,病毒检出与季节、年龄、性别等的关系。结果:1.经实验证实Seeplex多重RT-PCR能特异性扩增15种呼吸道病毒的目的基因,灵敏度高,稳定可靠。2. 2009-2010年上海地区0-3岁组儿童呼吸道病毒感染经Seeplex多重RT-PCR方法检测,病毒检出率为78.7%,多重感染率29.9%,前三位的优势病原是hRV、IVA、PIV-2。结论:1.两种多重PCR方法相比,Seeplex多重RT-PCR在病毒检出率和多重感染方面明显优于VRDAL多重巢氏PCR,可广泛应用于临床和科研实验室。2.本实验Seeplex多重RT-PCR方法成功研究儿童呼吸道感染病毒谱系特征为研究和开发微生物高通量检测方法奠定基础。