【摘 要】
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SOX9基因属于SOX基因家族,与哺乳动物胚胎发育、性别决定、人类遗传综合征和恶性肿瘤的发生有密切关系。MicroRNAPC-5P-1090(PC-1090)是在鹿茸生长点茸皮中新发现的小分子RNA
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SOX9基因属于SOX基因家族,与哺乳动物胚胎发育、性别决定、人类遗传综合征和恶性肿瘤的发生有密切关系。MicroRNAPC-5P-1090(PC-1090)是在鹿茸生长点茸皮中新发现的小分子RNA。为了验证SOX9基因是否是PC-1090的直接作用靶基因,本研究构建含有SOX9 3’UTR的野生型重组质粒(pMIR-Report-SOX9-3’UTR-WT)和突变型重组质粒(pMIR-Report-SOX9-3’UTR-MUT);将 pMIR-Report-SOX9-3’UTR-WT、pMIR-Report-SOX9-3’UTR-MUT 分别与 1090 mimics 和 control mimics 共转染 293T 细胞,Western blot检测转染后293T细胞中荧光素酶基因的表达量;分别以1090 mimics与control mimics转染Huh-7细胞(表达内源性的SOX9),Western blot检测转染后Huh-7细胞中SOX9蛋白表达的变化。结果显示:经测序证实荧光素酶报告载体pMIR-Report-SOX9-3’UTR-WT和pMIR-Report-SOX9-3’UTR-MUT 构建成功;Western blot 结果显示,共转染 PC-1090 mimics 与SOX9 3’UTR野生型重组质粒的293T细胞组,荧光素酶的表达量明显下降,而其他对照组荧光素酶的表达量无显著变化;与转染control mimics的Huh-7细胞组相比,转染1090 mimics的Huh-7细胞中SOX9蛋白的表达显著降低。结论:PC-1090具有生物学功能,且和SOX9 3’UTR上的位点特异性结合,靶向负调控SOX9基因的表达。
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