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血管生成素(angiogenin,ANG)是迄今为止唯一一个基于其促血管新生能力而被发现和分离纯化的血管生成因子(angiogenic factor)。它是分子量为14 kDa的碱性单链蛋白质,与肿瘤的发生、发展密切相关。研究发现,血管生成素不仅具有很强的促血管生成能力,而且能促进肿瘤细胞增殖。然而,对血管生成素促进肿瘤细胞增殖和诱导血管新生的分子机制认识还不全面,有待进一步研究。
近年来,基因组的研究已由结构基因组转向功能基因组,高通量扫描技术(包括基因组和蛋白质组分析技术)已被广泛应用于生命科学研究领域。这些技术可以从基因组或蛋白质组水平揭示外界刺激对细胞基因表达的影响,“中性”地反映该因素的生物学效应,为作用机制的探讨提供新的思路。
本学位论文采用双向凝胶电泳结合质谱技术研究血管生成素对HeLa细胞蛋白质表达谱的影响,以期发现血管生成素作用的应答蛋白质,从蛋白质组学角度探索血管生成素促肿瘤细胞增殖的作用机制。为实现以上目标,我们首先用血管生成素(1μg/ml)处理HeLa.细胞0.5小时、1小时、6小时、12小时和24小时,然后提取细胞总蛋白,进行双向凝胶电泳。电泳后的凝胶经银染、GS800扫描仪扫描和PDQuest7.4软件分析,建立了血管生成素处理组和对照组的细胞蛋白质差异表达图谱,结果发现共有97个蛋白质的表达发生5倍以上改变。最后,选取13个重复性较好且差异表达明显的蛋白进行质谱鉴定,确定其中7个蛋白质为嘧啶核苷一磷酸激酶、翻译起始因子1A、钙结合蛋白P22、皮离蛋白前体、干燥综合症1抗原、真核生物翻译起始因子1A(X/Y染色体)和含表皮生长因子结构域的fibulin样胞外基质蛋白-1的1、2、3、4异构体。这些蛋白质参与细胞信号传导、蛋白质的翻译和膜的运输等生物学过程。
研究结果显示,血管生成素能够引起HeLa细胞蛋白质表达谱的改变,已得到鉴定的7个蛋白质与HeLa细胞的增殖有着直接或间接的联系。当然,下一步应该鉴定更多的差异表达蛋白质,并深入探讨这些蛋白质的生物学功能和病理学意义.