【摘 要】
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胰岛素分泌的调控是糖尿病治疗中的一个十分重要的课题。已有研究表明活性氧(ROS)作为信号分子参与胰岛素分泌的调节,但其调控的分子机制尚不清楚。PTEN为β细胞中的一种磷酸
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胰岛素分泌的调控是糖尿病治疗中的一个十分重要的课题。已有研究表明活性氧(ROS)作为信号分子参与胰岛素分泌的调节,但其调控的分子机制尚不清楚。PTEN为β细胞中的一种磷酸酶,能够负调控PI3K/Akt信号通路,降低Akt的磷酸化水平,从而影响胰岛素分泌。PTEN的Cys124位点为催化活性中心,易被ROS氧化失活,而硫氧还蛋白(Trx)可使PTEN的氧化可逆恢复。本文通过RT-PCR方法成功构建了Trx真核表达载体(pcDNA3.0-Trx),并通过基因测序,质粒的酶切电泳以及Western blot技术进行了鉴定。同时,初步研究了H2O2对INS-1细胞中胰岛素分泌及PTEN蛋白表达水平、氧化水平的影响。研究过程中以H2O2为氧化因子刺激INS-1细胞,以DCFH-DA为探针检测了胞内的ROS水平的变化,以放射免疫法检测了INS-1细胞分泌的胰岛素水平,通过Western blot方法检测了PTEN蛋白的表达及氧化水平。结果表明,5-400μM H2O2导致胞内ROS水平呈浓度依赖性的增加,低浓度H2O2(≤100μM)促进胰岛素分泌,而高浓度H2O2(>100μM)抑制胰岛素分泌。同时,5-400μM H2O2呈浓度依赖性的增加INS-1细胞内PTEN蛋白的表达以及氧化水平,1 mM H2O2降低胞内PTEN的表达水平。这些结果为进一步研究ROS与胰岛素分泌的机制打下了基础。
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