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研究背景:
往复进行的上皮和间充质的相互作用是牙胚发育的重要特征。该种作用从发育启动的口腔上皮增厚开始,经历形态发生和细胞分化,一直持续到硬组织形成。目前关于牙胚发育的多数研究集中于诱导该过程中上皮和间充质相互作用的分子机制的探讨,并已取得较大的进展,提示牙胚具有与其他皮肤附属器(例如毛囊、羽毛等)的发育过程非常相似的形态学和分子学机制,大量的细胞外信号分子、细胞核内转录因子以及结构蛋白表达于发育中的牙胚,调控着在该过程中发挥重要作用的上皮和间充质的相互作用。在诸多相关信号分子中,转化生长因子β(TransformingGrowthFactor-β,TGF-β)超家族被证明在牙齿发育中起到了重要的作用,包括通过调节细胞外基质、核内转录因子、细胞黏附分子等的表达,参与调控牙胚发育和细胞分化。但对于TGF-β本身,已有的研究仍主要集中在对TGF-β1的研究上,而对同样重要的TGF-β2的报道却相对很少。
研究目的:
1.建立小鼠下颌第一磨牙牙胚发育的组织学数据库,掌握小鼠下颌第一磨牙牙胚发育各个时期的组织学特点。
2.研究TGF-β2在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育各个时期的表达特点,讨论TGF-β2在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育过程中的作用。
研究方法:
1.获取发育不同时期(E11天-P2天)的ICR孕鼠,3只孕鼠/时期,共计约430个鼠胚,制作鼠胚头部的前后向连续组织学切片,经过Mallory组织学染色,镜下观察小鼠下颌第一磨牙牙胚发育各个时期的组织学特点。
2.在组织学研究基础上,应用免疫荧光抗原抗体反应技术,研究小鼠下颌第一磨牙牙胚发育各个时期TGF-β2的表达特点,并进一步探讨其功能。
研究结果:
1.小鼠下颌第一磨牙牙胚的整个发育过程经历了三个不同的发育阶段:即发育启动阶段(E11天-E12天)、形态发生阶段(E13天-E17天)和硬组织形成阶段(E18天-P2天)。而且各个阶段均可观察到与上皮—间充质相互作用相对应的组织学表现,这些表现与以往的研究报道相似。
2.在小鼠下颌第一磨牙发育早期,TGF-β2在上皮和间充质中均有表达;在小鼠下颌第一磨牙发育后期,TGF-β2的表达主要集中于成牙本质细胞层、前成釉细胞层和成釉细胞层,并在成牙本质细胞分泌的牙本质内和成釉细胞分泌的牙釉质内有沉积。
结论:
1.验证了小鼠下颌第一磨牙牙胚的整个发育过程经历了三个不同的发育阶段:即发育启动阶段(E11天-E12天)、形态发生阶段(E13天-E17天)和硬组织形成阶段(E18天-P2天)。
2.首次较系统的观察了TGF-β2在小鼠下颌第一磨牙发育的各个时期的表达,发现呈现出不同的时间、空间的表达模式;在小鼠下颌第一磨牙发育的帽状期,TGF-β2蛋白可能由内、外釉上皮细胞合成和分泌,通过抑制上皮细胞的增殖调控牙胚的形态发生;在小鼠下颌第一磨牙发育的后期,TGF-β2蛋白可能由成牙本质细胞合成,通过旁分泌的方式分泌到前成釉细胞的细胞间质,诱导其分化成为成釉细胞,而且TGF-β2蛋白可能还调控了牙本质基质的形成。