成骨细胞诱导牙髓干细胞向成骨细胞方向分化的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liqiusheng2009
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目的:骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在特定的组织微环境下具有定向分化潜能。与BMSCs具有相似性的牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs),在成骨细胞分泌活性因子调控下能否发生定向分化。因此,本实验将成骨细胞对牙髓干细胞向成骨细胞诱导作用与矿化液诱导作用相对比,从而选择理想的DPSCs诱导条件。  方法:分别从正畸拔除牙或阻生第三磨牙中提取牙髓,胰酶消化法获得DPSCs,从颅盖骨中获取骨组织小块,胰酶消化法获得成骨细胞。利用插入式小室(Insert systerm)将成骨细胞与牙髓干细胞共培养做为实验组,单纯DPSCs细胞培养作为对照组1,矿化液培养牙髓干细胞作为对照组2。实验组分别与对照组1,对照组2进行比较。光学显微镜和透射电镜下观察细胞形态以及超微结构变化;MTT法:比较共培养法与单纯牙髓干细胞培养、成骨细胞细胞的增殖速度,检测共培养细胞生长状态;茜素红染色法检测矿化结果;RT-RCR(Reversetranscriptase polymerase chain reaction)分别检测骨涎蛋白(Bonesialoprotein,BSP)、Runx-2转录因子、骨钙蛋白(Osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-1,Col-1)等骨源性基因表达情况。  结果:光学显微镜以及透射电镜下观察实验组DPSCs的形态学发生以及超微结构呈现向成骨细胞样分化状态均较对照1对照组2明显;MTT检测显示三组对比下,共培养组DPSCs细胞增殖速度最快,细胞生长状态最佳;茜素红染色方法检测显示,28天后实验组矿化结节数目和面积显著性增加,较对照组1、2矿化作用明显;RT-PCR检测到实验组BSP、Runx-2转录因子、OCN以及Col-1等骨源性基因较对照组中表达阳性率明显增多,Runx-2第5天表达量较多,与成骨细胞早期分化过程吻合。OCN、Col-1随时间延长表达大量增加,与晚期分化过程吻合,三组基因表达差异具有统计学意义。  结论:成骨细胞分泌大量细胞因子或可溶性蛋白对牙髓干细胞的具有一定的诱导作用,较单纯DPSCs细胞培养以及矿化液诱导培养作用明显,是理想的且较为创新的诱导方法,为矿化条件提供参考,为组织工程学奠定了基础。
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