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猪瘟(classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)引起的一种以猪为专一宿主的高度烈性传染病。CSFV是具有囊膜的单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约12.3kb，由一个大的开放阅读框及两侧非编码区组成。E2为囊膜结构糖蛋白，N端具有B/C、A/D两个主要抗原区，能够刺激机体产生针对CSFV的特异性中和抗体，是CSFV重要的抗原蛋白。目前控制猪瘟的有效手段是疫苗免疫，其中以我国研制的猪瘟兔化弱毒疫苗（简称C株）应用最为广泛。但是猪瘟的优势流行毒株由1型渐转为以2型为主，且病猪常呈温和型临床症状。这些因素使得对猪瘟进行及时有效的诊断和预防变得更为困难。 本研究旨在(1)获得CSFV1型疫苗C株及浙江地区2型流行毒株E2原核蛋白及真核蛋白;(2)探明疫苗株和野毒株E2蛋白的免疫反应性差异;(3)初步建立基于疫苗株及流行毒株E2蛋白的间接ELISA检测方法，用于分析免疫血清与感染血清抗体水平变化和抗体效价等。 1、CSFV不同毒株E2蛋白原核表达 利用大肠杆菌原核表达方法获得了CSFV疫苗C株E2抗原区蛋白、浙江地区2型流行毒株E2抗原区蛋白、HZ毒株E2抗原区前90个氨基酸截短蛋白。 2、CSFV不同毒株E2蛋白真核表达 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对CSFV疫苗C株、流行HZ毒株及QZ毒株E2蛋白进行表达，获得纯化的C株E2真核蛋白、HZ株E2真核蛋白与QZ株E2真核蛋白。 3、CSFV疫苗C株与流行毒株E2蛋白免疫反应性比较 用ELISA及免疫印迹(Western blot，WB)方法将疫苗C株与流行毒株E2蛋白和疫苗C株血清、流行毒株QZ株血清分别反应，比较免疫反应性差异，结果表明:(1) E2原核表达蛋白与同源血清反应性优于异源血清。且HZ毒株包含前90位氨基酸的截短E2原核蛋白与HZ株抗原区E2蛋白的免疫反应性相似。(2)利用C株和流行毒株HZ株的E2原核蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA检测体系，优化的体系为每孔包被2μg抗原，血清稀释度为1∶100，加入5％大肠杆菌裂解液进行一抗孵育，SPA稀释度为1∶20000。(3)应用间接ELISA对不同免疫、感染血清的抗体水平进行测试，发现①疫苗C株及重组C株病毒免疫血清与同源的C株E2蛋白的免疫反应性显著优于异源的HZ株E2蛋白，效价较高;携带HZ株E2基因的重组C株病毒与HZ株E2蛋白的反应性优于C株E2蛋白，效价较高。②流行毒株感染血清与同源HZ株E2蛋白的反应性优于异源C株E2蛋白，表现为抗体水平上升较快，效价较高;③利用同源E2蛋白建立的间接ELISA检测方法与血清ELISA反应结果和商品化试剂盒的检测结果一致。 综上所述，猪瘟病毒流行毒株E2基因的变异，可以引起其免疫反应性的变异，可能是影响猪瘟疫苗免疫效果的因素之一。提示在新型疫苗研制和免疫抗体水平检测方面，有必要使用对应的抗原基因表达产物进行抗体水平检测才能获得比较准确的结果。