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细菌脂多糖(LPS)可以诱导成年小鼠或大鼠睾丸生殖细胞的凋亡,并抑制睾丸间质细胞睾酮的合成与分泌,继而影响精子发生。众多研究结果证实,孕期母体接触LPS引起子代明显的发育毒作用,如胎儿生长发育迟缓、胎儿死亡和子代神经发育损伤等。本课题旨在研究孕期母体接触LPS对雄性子代小鼠生殖发育的影响,并初步探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)在LPS引起小鼠生殖发育长期损害中的作用。1、孕期母体接触LPS对雄性子代小鼠生殖发育的影响为阐明孕期母体接触LPS对雄性子代小鼠生殖发育的长期损害作用,本研究共设置对照组和LPS组。LPS处理组孕鼠于妊娠第8~18天每天经腹腔注射给予LPS(8μg/kg),对照组孕鼠给予等容积生理盐水。妊娠第18天末次给药后8 h,每组各12只孕鼠被处死,取出胎鼠,辨认性别。雄性胎鼠被断头取血后,在显微镜下取胎鼠睾丸并行组织病理学检查,用RIA试剂盒检测血清内睾酮的水平,用RT-PCR方法检测StAR和睾酮合成酶mRNA表达水平,用免疫组织化学方法检测胎鼠睾丸间质细胞数目,用TUNEL方法检测胎鼠睾丸生殖细胞凋亡。其余孕鼠自然分娩。仔鼠出生后70天,所有雄鼠被处死,取单侧附睾进行精子质量分析;取睾丸称重并进行组织病理学检查;用睾酮放射免疫试剂盒检测血清和睾丸内睾酮水平;用TUNEL方法检测睾丸生殖细胞凋亡。研究结果发现,孕期母体接触LPS下调胎鼠睾丸组织StAR和P450scc mRNA表达,但LPS对雄性胎鼠睾酮水平无影响,且LPS组胎鼠睾丸组织病理学和生殖细胞凋亡亦无明显改变。在子代雄鼠成年期,LPS组雄鼠睾丸绝对重量显著低于对照组。与对照组相比,LPS处理组雄鼠附睾精子数量显著下降;精子存活率明显降低;精子活力有降低趋势,但差异没有统计学意义;放射免疫分析结果发现,LPS处理组雄鼠血清与睾丸内睾酮水平明显低于对照组;睾丸组织病理学检查结果显示,LPS处理组子代雄鼠睾丸生精小管管腔内径变大,生精细胞层数变少且排列不规则;TUNEL检测结果表明,孕期母体接触LPS明显诱导子代雄鼠睾丸生殖细胞凋亡的发生。2、TNF-α在LPS引起小鼠生殖发育长期损害中的作用为阐明TNF-α在LPS引起小鼠生殖发育长期损害中的作用,实验孕鼠被随机分成6组。处理组孕鼠于妊娠第17天经腹腔注射给予高剂量LPS(500μg/kg),对照组孕鼠给予等容量生理盐水。部分孕鼠在给予高剂量LPS(500μg/kg)前不同时点(4、12、24和48 h)经腹腔注射给予低剂量的LPS(10μg/kg)。所有孕鼠在高剂量LPS处理1.5 h后被处死,留取母鼠血清、羊水、胎肝和胎脑,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法来检测母鼠血清、羊水、胎肝和胎脑TNF-α的水平;采用RT-PCR方法检测胎肝和胎脑组织TNF-αmRNA表达水平。研究结果表明,孕鼠接触LPS显著升高母鼠血清、羊水、胎肝和胎脑组织TNF-α蛋白含量,但胎肝和胎脑组织TNF-αmRNA表达水平无明显差别。进一步研究结果发现,低剂量LPS预处理明显抑制高剂量LPS诱导母鼠血清、羊水、胎肝和胎脑组织TNF-α蛋白的释放,但对胎肝和胎脑组织TNF-αmRNA表达无影响。根据上述结果,本研究得出结论:1)孕期母体接触LPS引起雄性子代生殖发育长期损害;2)母源性TNF-α在LPS致小鼠生殖发育长期损害中可能起重要作用。