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为了鉴定CpTI基因在这些毛白杨体内是否依然存在,是否出现基因沉默现象,以及检验各转基因毛白杨株系的生长状况与抗虫能力,该研究测量各转基因株系萌条树高和地径,以衡量其生长状况;选用天幕毛虫(Malacosoma disstria)、舞毒蛾(Lymantria dispar L.)和杨雪毒蛾(Stilpnotia candida Staudinger)3种主要杨树害虫进行离体叶片抗虫试验;测试转基因植株老叶和嫩叶TSP和CpTI,并对TSP进行SDS-PAGE分析,进而检验外源基因的表达产物;提取转基因植株总DNA,进行PCR扩增和Southern杂交,鉴定外源CpTI基因的整合.通过上述研究得到如下主要结论:1.对转基因株系的树高和地径进行测定,结果表明,与未转基因株系相比,它们的树高和地径没有明显变化,说明外源基因的导入并没有对转基因杨树的速生特性产生明显负面影响.相反,TG04、TG34和TG80这3个转基因株系的树高和地径却较明显高于对照.2.与未转基因植株相比,所有供试转基因植株均能明显提高供试害虫的死亡率,降低幼虫的取食量、排粪量、蛹重、体重变化量和成虫的产卵量,其中,TG04、TG07和TG71这3个转基因株系的抗虫性相对较好,对3种参试昆虫的致死率均分别高于60％、50％和40％,这表明CpTI基因已在它们的树体内得到稳定表达.3.与未转基因植株相比,所有供试转基因株系叶片中总可溶性蛋白含量明显增加,其中老叶中的含量高于嫩叶.这表明转基因株系总可溶性蛋白含量的增加可能是CpTI基因表达的结果,或许是由于外源基因导入后促进或诱发杨树基因组中其它基因表达所致.进一步分析发现,转基因植株叶片中有较高含量的CpTI,而对照叶片中检测不到CpTI,这进一步证明了CpTI基因已在转基因株系中得到稳定高效表达.另外,在供试的7个转基因株系中,TG04、TG07和TG71这3个转基因株系的TSP和CpTI含量增加较为明显,说明CpT1基因在这3个转基因株系中的表达效果相对较好.4.TSP的SDS-PAGE分析结果发现,在所有供试转基因株系TSP的泳道上均出现1条分子量为11.3kD的清晰蛋白带,而在未转基因株系的泳道上却未检测到.通过比较分析发现,转基因株系所检测到的特异蛋白的分子量与CpTI分子量相当.5.转基因毛白杨基因组DNA的PCR扩增结果显示的分子量与CpTI分子量相当.5.转基因毛白杨基因组DNA的PCR扩增结果显示,参试的5个转基因株系均能扩增出1条450bp的片断,而未转基因植株基因组未能扩增出此片段;Southern杂交结果表明,转基因植株均显示出较强信号,而未转基因植株则没有信号显示,说明外源CpTI基因仍然整合在田间生长2年的转基因株系基因组中,并得到高效稳定表达.