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目的：研究酪氨酸激酶抑制剂A77 1726抑制重组人白细胞介素13(recombinanthuman interleukin 13，rhIL-13)介导白血病系Dami细胞原癌基因c-fos和c-myc表达，部分阐明IL-13及A77 1726对细胞生长调控的作用机制。
方法：
1.细胞培养：Dami细胞用含10％小牛血清的RPMI 1640液体培养基37℃，5％CO2常规培养。取生长状态良好的Dami细胞，调整细胞密度为5×108～1×109/L，在细胞因子诱导前先经无血清培养20小时。
2.量-效实验：绘制细胞生长曲线图和测定细胞吸光度值，观察A77 1726影响Dami细胞的最小浓度。
3.总RNA提取：以rhIL-13(100μg/L)和A77 1726(50μM)分别作用Dami细胞不同时间，提取各组总RNA，通过RNA电泳判断其是否符合实验要求。
4.RT-PCR方法：①检测rhIL-13作用Dami细胞0、15、30、60、120分钟，原癌基因c-fos mRNA的表达；②检测rhIL-13作用Dami细胞0、2、4、6小时，原癌基因c-myc mRNA的表达；③检测rhIL-13与A77 1726共同作用Dami细胞，原癌基因c-fos mRNA的表达；④检测rhIL-13与A77 1726共同作用Dami细胞，原癌基因c-myc mRNA的表达。
5.Western Blotting方法：取生长状态良好的Dami细胞，调整细胞密度为5×108～1×109/L，经过20h的无血清培养后，用rhIL-13(100μg/L)和A77 1726(50μM)分别作用0、15、30、60、120、240、360分钟，RIPA Buffer裂解细胞提取蛋白质，用Western Blotting方法检测c-Fos及c-Myc蛋白的表达。
结果：
①A77 1726作用Dami细胞的最小有效浓度是50μM。
②rhIL-13诱导Dami细胞c-fos mRNA表达(P＜0.05)，30min达到高峰(P＜0.01)。
③rhIL-13下调Dami细胞c-myc mRNA表达(P＜0.05)。
④rhIL-13诱导c-Fos蛋白表达(P＜0.05)，60min达到高峰(P＜0.01)。
⑤rhIL-13下调c-Myc蛋白表达(P＜0.05)。
⑥A77 1726阻断rhIL-13诱导Dami细胞c-fos mRNA的表达。
⑦A77 1726阻断rhIL-13对Dami细胞c-myc mRNA表达的下调作用。
⑧A77 1726阻断rhIL-13诱导Dami细胞c-Fos蛋白的表达。
⑨A77 1726阻断rhIL-13对Dami细胞c-Myc蛋白表达的下调作用。
结论：
①IL-13诱导Dami细胞原癌基因c-fos mRNA和蛋白质的表达。
②IL-13下调Dami细胞原癌基因c-myc mRNA和蛋白质的表达。
③A77 1726抑制IL-13诱导Dami细胞c-fos的表达。
④A77 1726抑制IL-13对Dami细胞表达c-myc的下调作用。