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研究背景:舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell cancer,SCC)是口腔癌中最常见的恶性肿瘤,目前治疗方法以手术为主,由于其术后复发率、转移率高和术后五年总体生存率低,严重影响患者生活质量[1]。因此,进一步研究舌鳞癌的发病机制,探索有效的治疗策略刻不容缓。随着肿瘤学的不断研究深入,越来越多的发病机制被揭露,其中表观遗传学是近年来的研究热点,越来越多的证据表明,表观遗传学修饰在癌症的发生、发展过程中扮演着重要的角色。表观遗传学(Epigenetics)是指不涉及基因组DNA序列的改变,基因表达即发生稳定的可遗传的表观型变化。广义上,DNA的甲基化、组蛋白修饰、泛素化、基因组印记、RNA干扰、染色质重塑等都属于表观遗传学的范畴,以上内容任何一项发生改变均可能导致疾病的发生,但与DNA序列改变不同的是,大部分的表观遗传学改变是可逆的,这使得治愈表观遗传学改变的疾病具有无限的可能性。组蛋白的乙酰化修饰作为表观遗传学中最重要的一种,在真核细胞内调节基因表达起着重要作用,需要由组蛋白乙酰化酶(histoneacetyltransferase,HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)这两组相反的蛋白家族共同调节。目前,组蛋白去乙酰化酶2(histonedeacetylase2,HDAC2)是HDACs中研究最多的一种,已被证实在多种癌症的发生、发展中发挥着极其重要的作用,抑制HDAC2的活性或表达已成为恶性肿瘤治疗中十分有效的分子靶点。EP300是HATs中KATs家族中的一员,EP300的突变可导致整个基因组的乙酰化水平下降或上升,使得基因的转录失衡,从而导致癌症的形成。蛋白质泛素化是泛素分子在多种酶的调节共同调节下,对靶向蛋白具有高度选择性的修饰过程。去泛素化是指已被泛素化的蛋白质在去泛素酶的作用下被降解为游离的泛素分子的过程。在真核细胞中,泛素化和去泛素化是通过讲解蛋白平衡看来维持细胞的正常生理过程,一旦二者的平衡被打破,将会导致疾病的发生。CYLD是一种常见的去泛素化酶,为体内的一种肿瘤抑制因子,主要通过去泛素化信号分子的方式调控细胞内蛋白质的平衡,与多种人类恶性肿瘤的发生发展密切相关,其中以皮肤肿瘤最常见。在细胞的生理活动中,基因表达的转录水平的调控是十分关键的。TATA结合蛋白是一种广泛存在于真核细胞中的转录因子,其主要作用是与RNA聚合酶IⅡ共同组成转录起始复合物,TBP是众多TATA结合蛋白中唯一能识别TATA盒并与其结合的转录因子,是RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ转录时都需要的,已被证实与多种疾病的发生有着密切的关系。本研究内容涉及表观遗传学的多个方面,主要包括:组蛋白修饰、泛素化等内容。本课题组前期研究对舌鳞癌中基因的表达差异进行了研究,在4-硝基喹啉一氧化物(4NQO)诱导C57BL/6小鼠舌癌模型中发现HDAC2、CYLD、EP300和TBP等基因的表达异常。是否上述基因在人舌粘膜、癌前病变和舌癌中表达存在差异?这种差异与肿瘤分化、淋巴结转移、患者生存率等临床病理参数的相关性如何?明确上述问题对了解HDAC2、CYLD、EP300和TBP基因在舌癌的发生、治疗和预后分析中所起的作用有重要意义。居于上述,本研究拟采用免疫组织化学的实验方法,分别对HDAC2、CYLD、EP300和TBP在舌粘膜、不典型在增生和舌鳞状细胞癌组织间的表达进行研究,分析其与舌鳞癌患者的临床病理特征之间的相关性,并分析其表达与舌鳞癌患者术后生存情况之间的关系。为探索舌鳞癌基因治疗靶点、针对舌鳞癌的预防及治疗策略提供理论基础和实验依据。[目的]:研究HDAC2、CYLD、EP300和TBP在舌粘膜、不典型增生及舌鳞状细胞癌中的表达,并分析其与患者的临床病理特征及生存情况的相关性,为明确HDAC2、CYLD、EP300和TBP基因在舌癌的发生、治疗和预后分析中所起作用提供实验证据。[方法]:标本分为:舌鳞状细胞癌组(n1=96、n2=45、n3=82、n4=92)、不典型增生组(n1=24、n2=13、n3=18、n4=26)、配对的舌粘膜组(n1=13、n2=10、n3=12、n4=12)行免疫组织化学染色,阳性细胞占比≥5%为阳性,并分别分析其与患者年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移等临床病理因子之间的相关性。Kaplan-Merier生存分析法分析患者生存状况。[结果]:1、HDAC2的表达情况:HDAC2的表达与患者年龄、性别、烟酒嗜好、病理分级、淋巴结转移等因素之间的差异无统计学意义(均P>0.05),但与癌症的TNM分期之间具有统计学意义(P<0.001)。HDAC2蛋白在舌鳞状细胞癌患者中的阳性表达率显著高于不典型增生组和舌粘膜组(P<0.00)。HDAC2的表达与患者术后生存情况之间无相关性(P=0.184),有淋巴结转移的患者术后生存时间明显短于无淋巴结转移的患者(P=0.000)。2、CYLD的表达情况:在舌粘膜、不典型增生和舌鳞状细胞癌三组间的表达无差异性,其表达与患者年龄、性别、烟酒嗜好、病理分级、淋巴结转移等因素无相关性,并且其表达与患者术后生存情况间无统计学意义(均P>0.05),有淋巴结转移的患者术后生存时间明显短于无淋巴结转移的患者(P=0.012)。3、EP300的表达情况:在舌鳞状细胞癌患者中的阳性表达率显著高于不典型增生组和舌粘膜组(P<0.000),其表达与患者年龄、性别、烟酒嗜号、病理分级、淋巴结转移等因素无相关性,并且其表达与患者术后生存情况间无统计学意义(均P>0.05),有淋巴结转移的患者术后生存时间明显短于无淋巴结转移的患者(P=0.040)。4、TBP的表达情况:在舌粘膜、不典型增生和舌鳞状细胞癌三组间的表达无差异性,其表达与患者年龄、性别、烟酒嗜好、病理分级、淋巴结转移等因素无相关性,并且其表达及淋巴结转移情况与患者术后生存情况间无统计学意义(均P>0.05)。[结论]:HDAC2、EP300在人舌鳞状细胞癌中的阳性表达率明显高于不典型增生组和舌粘膜组。HDAC2阳性表达的患者肿瘤TNM分期多为较高的Ⅲ-Ⅳ期,提示HDAC2可作为舌鳞癌预后的一个可靠的分子参考指标。有淋巴结转移者的术后生存时间明显低于无淋巴结转移者。