石榴中化学成分的HPLC-MS分析

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石榴(Punica grunatum L.)为石榴科石榴属落叶灌木或小乔木,在中国各地均有分布,其种质资源丰富,根据用途不同可分为食用型和观赏型石榴。食用型石榴果实味道酸甜可口,是备受青眯的水果之一。近期研究证实其花、皮、籽和果汁等均表现出多种生物活性,如抗氧化、预防和治疗肿瘤、抑菌、抗动脉粥样硬化和抗炎等,尤其是石榴花提取液对糖尿病的高效预防和治疗作用。为进一步阐述石榴药理活性成分,促进石榴生物学活性和营养价值的研究,本试验对石榴的不同组织花、皮、籽和果汁中的组成成分进行了系统分析,同时还对石榴花多糖的体外抗氧化活性进行了研究。  本研究主要内容包括:⑴合成了灵敏度高、专属性强的荧光衍生试剂2-[2-(对甲苯磺酸酯)乙基]吡唑并[3,4-b]-7-甲基喹啉(MPB),建立了基于柱前MPB标记HPLC-FLD-MS技术的25种脂肪酸分析方法,利用该方法对石榴各组织中游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)进行定性定量分析。结果表明,石榴所有部位中脂肪酸成分相似,石榴皮和汁中含量相对较少。⑵选择2-(7H-二苯并[a,g]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯(DBCETS)为柱前荧光标记试剂,结合HPLC/FLD-APCI/MS技术,建立灵敏度高、分离度好、专属性强的三萜酸分析方法。6种三萜酸标记物在35 min内即可实现基线完全分离,检测线可达ng/mL。将该方法应用于石榴花、皮和籽中三萜酸的组成及含量测定,发现各组织中三萜酸成分相似但含量有显著差异,石榴花中三萜酸含量明显高于石榴籽和皮。⑶采用响应面RSM法优化石榴花多糖的微波提取参数,在预测的最佳条件下提取率可达10.2%;建立了基于柱前1-萘基-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP)标记的HPLC-DAD方法,测定石榴花多糖的单糖组成;同时建立体外抗氧化体系,采用1,l-苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)自由基和羟基自由基的清除试验,研究石榴花多糖的抗氧化活性。⑷植物激素为植物受激时产生的微量信号分子,此次试验用微量草酸刺激石榴花,在不同时间段采摘样品,利用建立的基于苯并[b]吖啶酮-5-乙基对甲苯磺酸酯(BAETS)标记的HPLC-FLD-MS分析方法,对上述样品中植物激素进行定性定量分析,发现经草酸刺激后石榴花中植物激素的含量和种类发生明显变化。
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