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在乳腺生物反应器研发过程中,外源基因表达量不高和整合位点的多样化一直制约着乳腺生物反应器的研发进度。在前期的研究中,本研究所构建了乳腺特异启动子——山羊β酪蛋白(P1A3)调控的人转铁蛋白(human transferrin, TF)表达质粒,通过显微注法获得了数个转基因小鼠家系,但这些转基因小鼠中转铁蛋白的表达却出现了明显得差异。为此,系统地培育了P1A3-TF-neo转基因小鼠家系,并通过PCR方法筛选携带外源基因的转基因小鼠;应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测转铁蛋白的表达量,筛选出高表达量的转基因小鼠传代培育,该家系繁衍到F4代。
本毕业论文在上述研究工作基础上,通过优化的反向PCR(Inverse PCR)法分析不同表达量的转基因小鼠中转铁蛋白整合位点的旁侧序列情况。同时利用定量PCR技术检测外源基因在P1A3-TF-neo转基因小鼠后代中的拷贝数。结合转基因后代小鼠外源基因的表达情况,探讨转基因整合位点、拷贝数与其表达效应之间的关系,即外源基因的不同表达水平与外源基因的整合位点情况,以造成位置效应的影响,及与整合插入位点和拷贝数相关性。为寻找特异、高表达位点以进一步构建定点整合载体来制备乳腺生物反应器—转基因动物提供有指导价值的理论和技术基础。