【摘 要】
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近年来,阳离子脂质体作为非病毒载体在基因治疗领域内得到了广泛的应用。阳离子脂质体生物相容性和生物降解性好,免疫原性低,能包裹疏水性和亲水性物质进入细胞,与病毒载体相
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近年来,阳离子脂质体作为非病毒载体在基因治疗领域内得到了广泛的应用。阳离子脂质体生物相容性和生物降解性好,免疫原性低,能包裹疏水性和亲水性物质进入细胞,与病毒载体相比,安全性高。本实验首次将双向电泳技术和iTRAQ定量蛋白质组学技术相结合,应用于脂质体转染后的Hep-2细胞的蛋白质表达谱的筛选研究,从蛋白表达的层面研究脂质体对细胞生理活动的影响。双相电泳技术进行样品蛋白分离后,实验组共检测到1416个蛋白,其中表达量上调1.2倍的蛋白为58个,下调蛋白为42个。根据以上结果选择iTRAQ技术进行精确定量分析,实验组鉴定到4640个蛋白,具有定量信息的为3507个蛋白,其中包含146个表达上调1.2倍的差异蛋白和112个下调蛋白,对差异蛋白进行功能注释表明其功能主要与生物调控和代谢过程、细胞应激反应和免疫反应相关;根据注释结果进行代谢通路、结构域和GO富集分析,发现脂质体转染Hep-2细胞后的差异蛋白主要与补体系统通路和ECM受体相互作用通路,说明差异蛋白多与细胞防御机制和细胞迁移相关;进一步功能研究表明这些差异蛋白质主要参与应激反应、基因表达调控,与胞内信号转导、DNA损伤修复、以及细胞增殖、分化和凋亡等过程相关。该研究结果说明实验室自制脂质体CDO14影响Hep-2细胞内生理活动,参与细胞生物调控和代谢反应,具体机制仍需近一步研究。本实验为揭示脂质体对细胞的影响提供实验依据,为近一步开发高效低毒的脂质体转染试剂奠定基础。
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