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目的本研究通过构建小鼠T细胞淋巴瘤模型,应用黄芪(astragalus mongholicus)联合吉西他滨(gemcitabine, GEM)治疗小鼠T细胞淋巴瘤,探讨黄芪对荷瘤小鼠化疗后T辅助细胞1型细胞亚群(Thelper cell type1cells cellular subpopulations, TH1)/T辅助细胞2型细胞亚群(T helper cell type2cells cellular subpopulations, Th2)细胞因子表达的影响及免疫机制研究,评价黄芪对机体的免疫保护作用,为T细胞淋巴瘤的免疫治疗研究提供实验依据及理论依据。方法1本研究采用皮下注射法构建小鼠T细胞淋巴瘤动物模型。2将120只C57BL/6小鼠随机分为5组,其中24只为正常对照组小鼠不接种EL-4细胞,其他4组即96只小鼠接EL-4细胞,待荷瘤小鼠瘤体长至lcm3左右,将荷瘤小鼠按原编码输入SPSS,由软件随机分为4组。最终分组即：正常对照组(n=24)不做任何处理；荷瘤小鼠空白对照组(n=24)腹腔注射生理盐水0.2ml,第1、8、15天给药,3周为一周期；吉西他滨化疗组(n=24)腹腔注射,给药剂量为80mg/kg鼠重,第1、8、15天给药,3周为一周期；黄芪治疗组(n=24)腹腔注射,给药剂量为12g/kg鼠重,化疗第3天后给药,每天给药；吉西他滨+黄芪治疗组(n=24)吉西他滨腹腔注射,给药剂量为80mg/kg鼠重,第1、8、15天给药,3周为一周期；黄芪腹腔注射,给药剂量为12g/kg鼠重,化疗第3天后给药,每天给药。3大体观察与组织形态学研究：每天观察各组小鼠的精神状态及活动情况,测量小鼠体重,游标卡尺测量肿瘤的最长径L和最短径W,4组荷瘤小鼠分别于d7、d14取瘤体组织标本,制备HE染色瘤体组织切片,光镜下观察各实验组不同时间点瘤体组织形态学变化。4生存期：每日记录各组小鼠的死亡情况,最终计算小鼠生存期。5酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)：4组荷瘤小鼠分别于d7、d14取瘤体组织标本,制备HE染色瘤体组织切片,光镜下观察各实验组不同时间点瘤体组织形态学变化。结果1荷瘤小鼠体重在吉西他滨给药第1、7、14天,较给药前体重逐渐升高。正常对照组与荷瘤小鼠空白对照组、吉西他滨化疗组、黄芪治疗组、吉西他滨+黄芪治疗组两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。2各组荷瘤小鼠瘤重,吉西他滨给药d7,吉西他滨组、黄芪组、吉西他滨+黄芪组各组小鼠平均瘤重两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。吉西他滨给药d14,吉西他滨组、吉西他滨+黄芪组、荷瘤小鼠空白对照组各组小鼠平均瘤重,黄芪组除外两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3观察各实验组小鼠瘤体生长情况,各荷瘤小鼠组在接种第7天和第9天,差异不具有统计学意义(P>0.05)；接种第11天,荷瘤小鼠空白对照组与吉西他滨化疗组、吉西他滨+黄芪治疗组(黄芪治疗组除外)两两比较差异有统计学意义(P<0.05),吉西他滨化疗组与黄芪治疗组两两比较差异有统计学意义(P<0.05),黄芪治疗组与吉西他滨+黄芪治疗组两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。接种第13天,荷瘤小鼠空白对照组与黄芪治疗组两两比较差异无统计学意义(p>0.05),吉西他滨化疗组与吉西他滨+黄芪治疗组两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。接种第15天,各组瘤体体积随时间逐渐增长,除吉西他滨化疗组与吉西他滨+黄芪治疗组两两比较差异无统计学意义伊>0.05),其他各组两两比较均有统计学意义伊<0.05)。4各荷瘤小鼠抑瘤率,吉西他滨组、黄芪组、吉西他滨+黄芪组抑瘤率分别为52.92%、45.61%、72.81%。5HE染色组织病理学观察可见吉西他滨+黄芪治疗组有较多的肿瘤细胞坏死区。6酶联免疫吸附剂测定,各组荷瘤小鼠d7,各组细胞因子IFN-γ、IL-12的表达呈下降趋势,Th2型细胞因子IL-4,黄芪组和吉西他滨化疗组+黄芪治疗组低于其他三组,黄芪组细胞因子IL-10低于正常对照组。各组荷瘤小鼠d14,黄芪治疗组和吉西他滨+黄芪治疗组细胞因子IL-12、IFN-y表达明显升高,其中吉西他滨+黄芪治疗组细胞因子IL-12、IFN-γ表达高于黄芪组,Th2细胞因子IL-4、IL-10,在黄芪治疗组和吉西他滨+黄芪治疗组的表达明显降低,而吉西他滨+黄芪治疗组的IL-4、IL-10的表达低于黄芪治疗组,各组细胞因子表达比较及两两比较均具有统计学意义。结论1成功构建了小鼠T细胞淋巴瘤模型,从瘤体体积、抑瘤率、各组肿瘤组织HE(苏木精一伊红)染色病理形态学、Thl/Th2型细胞因子等的变化,证实黄芪联合化疗药对T细胞淋巴瘤小鼠机体具有免疫保护作用。2黄芪能增强小鼠的免疫功能,改善疾病症状,最终延长小鼠生存期。