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以胞内表达抗原蛋白的酿酒酵母作为疫苗,通过皮下注射免疫人和动物,获得了强有力的抗原特异的免疫应答。酿酒酵母基因组测序已经完成,遗传背景清楚,基因工程操作成熟。酿酒酵母不含有内毒素,其安全性早已获得广泛认可。酿酒酵母的颗粒结构,使其能转一而有效的向抗原呈递细胞传递目的抗原。酿酒酵母细胞壁结构和成分,使其具有强大的免疫佐剂活性,使抗原呈递细胞上调免疫激活所必须的三种信号。以酿酒酵母为载体的胞内表达目的抗原的疫苗,由于其生产成本非常低,具有非常大的运用潜力和经济价值,尤其是作为兽用疫苗。然而,由于不同的目的抗原的特性,使得酿酒酵母胞内表达抗原蛋白在很多情况下,由于非理想的翻译后修饰和低水平的表达产量而受到限制。酿酒酵母具有独立于基因组之外的附加体质粒,而且对其进行基因操作的技术已经很成熟。去年有文献报道,将酿酒酵母启动子、多克隆位点和终止子替换为哺乳动物的相关元件,将eGFP插入多克隆位点,在体外培养的巨噬细胞能够吞噬含有这种质粒的酿酒酵母并获得了eGFP的表达。相对于将目的抗原表达于酿酒酵母胞内作疫苗,这种在酿酒酵母中扩增目的质粒而使目的抗原在哺乳动物抗原呈递细胞中表达的方法具有更广泛的适应性,尤其在目的抗原蛋白对酿酒酵母具有毒性的情况下。本实验将pcDNA3.1-GFP的CMV启动子、多克隆位点和BGH终止子,通过PCR扩增,克隆到酶切去除启动子、多克隆位点和终止子的pYES2/NT A上。然后将获得的酿酒酵母-哺乳动物细胞表达载体和pcDNA3.1-HA进行酶切,将HA克隆到该载体上。下一步进行动物实验,验证其免疫效果后,将近一步改造该载体和酿酒酵母菌株,使其不含有自身的2micron质粒,且能在普通培养基上高密度生长而附加体质粒能够以高拷贝数稳定存在于酿酒酵母中。