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疯草是世界范围内危害草原畜牧业生产最为严重的一类毒草,广泛分布于我国西部和美国、俄罗斯、澳大利亚、加拿大等国家,给畜牧业生产造成巨大损失。尽管如此,疯草却含有与苜蓿相当的粗蛋白含量,具备作为优良饲草的潜力。针对防治疯草中毒和综合利用疯草,学者们从不同思路和角度出发进行研究。疯草的主要有毒成分是苦马豆素(swainsonine, SW),从免疫学角度讲,SW可作为半抗原,与大分子载体蛋白偶联,化学合成为人工抗原,并制成疫苗,诱导机体产生特异性抗体,使动物获得免疫力并在采食疯草时得到保护。本论文目的在于将SW与3种大分子蛋白(OVA, BSA, HSA)偶联得到不同载体的苦马豆素人工抗原SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA,并制成疫苗接种小鼠,以研究不同载体疫苗对小鼠的免疫原性,从而获得一种理想的SW疫苗,为疯草防治提供理论和实践依据。论文首先制备了苦马豆素(半抗原)纯品,然后进行了3种不同载体SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA的合成及其对小鼠的免疫原性研究。结果如下:1变异黄芪中苦马豆素的分离、鉴定本试验是为苦马豆素免疫原合成提供原料。以变异黄芪干草粉为材料,用工业酒精热回流提取后减压回收溶剂,浸膏用1 mol/L HCl酸化,氯仿萃取除去杂质,水液部分用固体NaOH或浓NH3·H2O调pH至9-10,再用正丁醇萃取6-7次,回收正丁醇得到总生物碱,将总生物碱硅胶拌样,硅胶柱层析,洗脱剂洗脱,TLC检测,同类合并,挥干后再经氨性氯仿处理。将氨性氯仿部分干燥后100℃油浴减压升华得到白色针状结晶,经TLC,MP,IR,MS分析鉴定为苦马豆素。2 SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA的合成研究将SW与活性酯在70℃条件下反应制备季铵盐,然后将季铵盐分别与OVA, BSA, HSA冰浴搅拌反应12 h,制备SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA,透析并冷冻干燥,采用紫外分光光度法测定SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA的偶联率。得到偶联率分别为13、10和19的SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA。3 SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA对小鼠的免疫原性研究将35只昆系小白鼠随机分为A,B,C,D,E,F和G组,每组5只。分别用大剂量SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA免疫A、C、E组,用小剂量SW-OVA, SW-BSA, SW-HSA免疫B、D、F组,G组空白对照。首次免疫时,在小鼠颈部两侧、背部及后腿内侧分5点皮下注射弗氏完全佐剂乳化制备的抗原液,抗原量为大剂量组0.1 mg/只,小剂量组0.05 mg/只。第15天进行第2次免疫,弗氏不完全佐剂乳化制备抗原液,抗原量均为前一次免疫所用抗原量的1.5倍,第29天进行第3次免疫,抗原用生理盐水溶解后免疫注射小鼠,抗原量为第2次免疫的1.5倍。从第28天采血,ELISA检测血清中SW抗体效价。每7 d采集1次;从第13次采血开始,每14 d采集1次血样。ELISA测定结果显示, A,B,C,D,E,F组试验小鼠均产生SW抗体,A,B组在第98天时抗体效价达到峰值,分别为213和212,C,D,E,F组有微弱SW抗体产生,且抗体效价呈上升趋势,在第35天达到峰值,为22,之后便衰减至零。结果表明,不同载体的苦马豆素人工抗原均可诱导小鼠产生抗体,SW-OVA的免疫原性明显优于SW-BSA和SW-HSA,大剂量组优于小剂量组。