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目的:利用分子生物学方法获取兔的纤维连接蛋白(Fibronectin)、层粘连蛋白(Laminin)的基因cDNA构建质粒载体,探讨Fibronectin与Laminin在周围神经断端修复再生中的效果及Fibronectin和Laminin两种蛋白的分子机制。 方法:将兔坐骨神经内Fibronectin和Laminin两个蛋白的基因cDNA获取并行基因扩增,分别构建Fibronectin、Laminin质粒载体。取大兔40只,随机分为4组,手术切断坐骨神经,依次利用对应成分修复神经断端。A组Fibronectin、Laminin cDNA;B组Fibronectin cDNA;C组:Laminin cDNA;D组:空白组。术后分别于4w、8w,12w对实验动物行一般情况的观察:包括进食和体重,患肢手术切口的愈合状况,患肢足部针刺觉,足趾运动情况,有无溃疡,患侧肌肉萎缩等,并对修复神经段取材,从神经传导速度、腓肠肌纤维横径测量等方面评定神经功能恢复情况,比较不同分组之间的神经损伤再生修复效果水平。 结果:1.采用双酶切法鉴定纤维连接蛋白重组质粒示:切出5000bp和300bp条带,切出条带大小符合理论预期,送生物公司经测序与其标准序列对比证实Fibronectin质粒构建成功。采用双酶切法鉴定证实层粘连蛋白重组质粒示:切出5000bp和600bp条带,切出条带大小符合理论预期,送生物公司经测序与其标准序列对比证实Laminin质粒构建成功。2.术后,A组的神经传导速度明显优于其他三组,A组肌纤维较B、C、D组明显更粗大且细胞核数量更多,B组与C组神经传导速度均优于D组且肌纤维相较D组更粗大,细胞核数量更多。 结论:Fibronectin、LaminincDNA基因能够促进内环境细胞大量合成Fibronectin、Laminin。纤维连接蛋白与层粘连蛋白两种蛋白的表达,可以更好促进受损神经的再生修复,这为临床神经损伤修复提供更为有效的修复材料。