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研究目的:
糖皮质激素(glucocorticoid:GC)是一种常用的抗炎药物。长期或大量使用GC会导致类固醇肌病(steroid myopathy:SM)的发生,但该病目前还没有一种有效而又无毒副作用的绿色治疗方法。SM成病的一个重要的原因可能是SM病人中成肌细胞增殖受到抑制。他汀类药物(statins)是目前使用广泛的降胆固醇药物,它的其中一个副作用也是引起肌病。已有实验表明,statins能明显地抑制C2Cl2细胞的增殖。细胞水平的研究表明,尽管statins与GC单独作用会抑制细胞增殖或引起凋亡;但它们同时作用于平滑肌细胞时,GC可以抑制statins诱导的细胞凋亡。所以,本研究用地塞米松(dexamethasone:DEX)和辛伐他汀(simvastatin:SIM)共同处理C2Cl2成肌细胞,研究statins能否用于治疗SM以及GC能否用于治疗statins引起的肌病。光生物调节作用(photobiomodulation:PBM)是单色光或激光对生物系统的非损伤调节作用,有可能发展成为治疗类固醇肌病和statins引起的肌病的一种绿色疗法。
研究方法:
首先研究C2Cl2成肌细胞增殖特性。然后检测了不同浓度的DEX和SIM单独处理对成肌细胞增殖的抑制效应。进一步探讨了不同浓度的DEX和SIM共同处理对成肌细胞增殖的抑制效应。最后观察了红光范围(640±17 nm)发光二极管[red light(640±17 nm)from lightemitting diode array:RLED]对DEX或者SIM抑制成肌细胞增殖的康复作用。实验过程中用甲基噻唑基四唑[the 3-(4,5-dimethylthiazo1-2-y1)-2,5-diphenyltetrazolium bromide:MTT]比色法评价细胞增殖。
研究结果:
1.各移殖密度的细胞均出现了典型的生长曲线。初始密度为2000/孔、3000/孔和4000/孔的细胞在培养2-3天后进入对数生长期,而1000/孔的细胞在移殖后4-5天才开始对数增长。4000/孔的细胞到培养第5天后开始进入平台期。因此选择3000/孔移殖密度,培养4天的C2C12细胞为对象研究DEX对细胞增殖的影响。
2.孵育3天25 nM-10 μM的DEX都可以显著的抑制C2C12成肌细胞增殖(P<0.01)。照射强度为0.25-1.5 mW/c㎡,照射时间为15分钟的条件下,都不能观察到RLED对100 nM DEX抑制成肌细胞增殖的康复作用(P>0.05)。
3.20 nM、200 nM和2μM的SIM处理两天对C2C12的增殖没有影响,也观察不到PBM(P>0.05)。20μM的SIM处理两天抑制C2C12的增殖(P<0.01),细胞成活率下降到37.2%。强度分别为0.229mW/c㎡、0.848 mW/e㎡和1.401 mW/c㎡的RLED照射2天,每天照射15分钟,都能显著促进被20 μM SIM处理过的C2Cl2细胞的增殖状态(P<0.05)。
4.SIM(浓度分别为0、2μM和5μM)和DEX(浓度分别为0、100 nM、500 nM和1 μM)共同作用组与SIM单独作用组相比,MTT值显著下降(P<0.01)。但在500 nM、1 μM DEX组别中,SIM和DEX共同处理与DEX单独处理比较,差异不具有显著性(P>0.05)。
研究结论:
RLED对SIM抑制的C2C12增殖有康复作用,但对DEX抑制的细胞增殖却无效。SIM和DEX的联合作用对单独作用抑制细胞增殖的效应有所增强。这些研究结果为治疗SM和服用statins引起的肌病等方面临床奠定了一定的理论基础。