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B7-H4(B7S1、B7x)属于免疫球蛋白超家族，为B7家族成员，能通过抑制T细胞增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调节T细胞的免疫应答，其在多种肿瘤组织中的高表达，与肿瘤的免疫逃逸关系密切，并已被确认是某些肿瘤的新型肿瘤标志物。
[目的]
制备鼠抗人BT-H4单克隆抗体，并对其进行初步鉴定，为进一步研制B7-H4检测试剂盒奠定基础。
[方法]
1.IPTG诱导hB7-H4胞外区融合蛋白表达，SDS-PAGE电泳鉴定，将重组基因工程菌扩大诱导表达，亲和层析法纯化诱导的蛋白。
2.将纯化的蛋白与弗氏佐剂乳化，将其作为抗原免疫BALB/c雌性小鼠。
3.融合骨髓瘤细胞与脾淋巴细胞，采用酶联免疫技术筛选阳性杂交瘤细胞，有限稀释法对阳性细胞进行克隆化。
4.将杂交瘤接种于BALB/c雌性小鼠腹腔中诱导产生腹水，采用亲和层析法纯化腹水中单抗。
5.Western blot鉴定单克隆抗体。
[结果]
1.蛋白的表达与纯化：制备的融合蛋白经SDS-PAGE鉴定，其纯度达到电泳纯，可用做单抗制备的靶抗原。
2.单抗的制备与鉴定：用纯化的hB7-H4融合蛋白免疫BALB/c小鼠，对小鼠外周血多抗效价检测，结果其双向琼脂扩散效价为1:16，ELISA效价达1:12800，提示小鼠免疫成功。经细胞融合、筛选、克隆化后得到了持续、稳定分泌鼠抗人B7-H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株；ELISA效价达到1:16000；Western blot分析结果显示，抗hB7-H4单抗与免疫原及天然抗原均能特异性结合。
[结论]
成功制备了鼠抗人B7-H4单克隆抗体，通过对免疫原及天然抗原进行检测，提示该抗体可用于B7-H4检测，为进一步研制B7-H4检测试剂盒奠定了基础。