侧脑室注射PLXSN-bcl-2基因治疗缺血性脑梗死及其对VEGF影响的动态研究

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研究目的 动态观察高效表达B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)的质粒重组体PLXSN-bcl-2经侧脑室注入缺血性脑梗死大鼠模型后,对于脑梗死的治疗效果、对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响以及bcl-2蛋白的表达状况。 研究方法 将180只健康Wistar大鼠均采用Zea-Longa线栓法制成大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)2h模型,按照数量平均分为3组:生理盐水组、空质粒组和质粒重组体PLXSN-bcl-2组(简称bcl-2组),分别于梗死后立即经侧脑室注入生理盐水、空质粒PLXSN和质粒重组体PLXSN-bcl-2,采用红四氮唑(TTC)染色、显微图像分析系统、数码相机拍照及免疫组化的方法分别检测脑缺血再灌注3h、6h、24h、48h、72h后的脑梗死体积、bcl-2蛋白表达和VEGF蛋白表达的状况。各组数据均以(?)±s表示,数据分析采用SPSS V10.0软件进行单因素方差分析及t检验。 研究结果 采用显微图像分析系统及TTC法染色检测各组大鼠不同的缺血再灌注时间点的脑梗死体积。结果显示,bcl-2组各时间点大鼠脑梗死体积明显小于其他2组同一时间点的脑梗死体积(P<0.01),各组脑梗死体积均随缺血再灌注时间延长而逐渐增大,于72h未达到峰值。单因素方差分析结果显示:生理盐水组和空质粒组治疗效果无明显差异(P>0.05),bcl-2组与上述2组有明显差异(P<0.01)。 采用显微图像分析系统、免疫组化法检测各组bcl-2蛋白表达阳性细胞面积的百分比。结果显示,与其他2组相比,在同一时间点bcl-2组的bcl-2蛋白表达明显增多(P<0.001),生理盐水组与空质粒组bcl-2蛋白表达于3h开始缓慢增加,至48h达到峰值,随后逐渐减少。bcl-2组在6h内缓慢增加,从6h开始迅速增加,:z4h达到峰值,随后逐渐减少。生理盐水组和空质粒组bcl一2蛋白表达无明显差异(P>0.05),bcl一2组和上述2组之间均有明显差异(P<0.01)。 采用显微图像分析系统、免疫组化法检测各组VEGF蛋白表达阳性细胞百分比。结果显示生理盐水组和空质粒组VEGF蛋白表达于3h开始逐渐增加,于24h达峰值,之后迅速下降;bcl一2组于3h开始迅速增加,于24h达到峰值,之后逐渐下降。bcl一2组在同一时间点的VEGF蛋白表达明显高于其他2组(P<0.001)。生理盐水组和空质粒组VEGF蛋白表达无明显差异(P>0.05),bcl一2组和上述2组之间均有明显差异(P<0.01)。结论 经大鼠侧脑室注射质粒PLXSN一bCI一2重组体有明显缩小脑梗死体积的治疗作用,bcl一2蛋白得到了有效表达,而且对于vEGF蛋白的表达有明显促进作用,bcl一2组和生理盐水组、空质粒组的治疗效果差异明显,可以早期起效,并可持续发挥作用,通过本实验可以证明,侧脑室注射质粒PLXSN一bcl一2重组体对缺血性脑梗死有明显的治疗作用。
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