【摘 要】
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目的为提高骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的能力,同时使BMSCs被绿色荧光蛋白(GFP)稳定标记,探讨携带GFP和人bFGF基因的慢病毒载体(lenti-bFGF-
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目的为提高骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的能力,同时使BMSCs被绿色荧光蛋白(GFP)稳定标记,探讨携带GFP和人bFGF基因的慢病毒载体(lenti-bFGF-GFP)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达及不同的感染复数MOI(multiplicity of infection)转染骨髓间充质干细胞的效率。方法全骨髓法分离培养纯化大鼠BMSCs。实验分成三组:携带GFP和人bFGF基因慢病毒感染的BMSCs (bFGF-GFP-BMSCs,实验组),携带GFP基因慢病毒感染的BMSCs (GFP-BMSCs,空载体组),未经感染的BMSCs (空白组);以定量酶联免疫吸附分析(ELISA)和半定量RT-PCR检测各组细胞培养72小时后bFGF的表达。MOI分别为10,30,50转染BMSCs,荧光显微镜观察GFP阳性率。结果(1)ELISA法结果显示:转染72小时, bFGF-GFP-BMSCs组表达bFGF蛋白量明显高于GFP-BMSCs组和BMSCs组,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。(2)RT-PCR结果显示:转染72小时,与GFP-BMSCs组和BMSCs组相比,bFGF-GFP-BMSCs组表达bFGF mRNA明显增高。(3)MOI分别为10,30,50,其转染BMSCs的效率分别为:36.6%,84.2%,98.5%。结论携带GFP和人bFGF基因慢病毒成功转染大鼠骨髓间质干细胞,并在细胞内成功表达,为以后bFGF基因修饰的骨髓间充质干细胞的移植治疗脊髓损伤研究奠定了基础。MOI为50时,BMSCs的慢病毒转染率超过了85%。
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