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目的：①通过靶向ATP6L(V-ATPase质子泵跨膜V0结构域中的c亚单位)的RNA干扰抑制质子泵的功能，达到增敏弱碱性化疗药物在耐药的乳腺癌细胞及肝癌细胞中的作用。②通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能，检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。
方法：⑴预先用不影响细胞生长的50 nM质子泵的特异抑制剂bafilomycin A1处理MCF-7/ADR细胞，用MTS方法检测细胞中Dox的IC50值。单独转染化学合成的siRNA片段或与HA-ATP6L质粒共转染MCF-7/ADR细胞，用qRT-PCR及Western blot筛选有效干扰片段。用有效的ATP6L干扰片段或干扰对照转染MCF-7/ADR细胞，通过用流式细胞仪检测ATP6L表达下调后的溶酶体酸度；用共聚焦显微镜观察Dox于细胞中的分布。ATP6L表达下调联用肿瘤化疗药物，用台盼兰拒染的方法得出细胞的生存率；用annexin V-FITC/PI试剂盒，通过流式细胞仪检测细胞的凋亡率。⑵用靶向ATP6L的RNA干扰片段与化疗药物联用后，分别检测Bel-7402/5-FU肝癌耐药细胞的生存率及凋亡率。构建HA-ATP6L真核表达载体；转染Bel-7402/5-FU细胞并筛选过表达HA-ATP6L的单克隆；用MTS方法检测单克隆细胞中Dox及5-FU的IC50值。⑶用有效的ATP6L干扰片段及干扰对照转染MCF-7/ADR细胞，通过荧光分光光度计检测BCECF与细胞分泌上清孵育后激发的荧光量，反映细胞分泌氢离子的能力；用qRT-PCR检测细胞中基质金属蛋白酶MMP-2的表达情况；用明胶酶谱方法检测细胞分泌上清中的MMP-2的活性；用细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞体外侵袭能力。
结果：①bafilomycin A1预处理MCF-7/ADR细胞可以提高细胞对Dox的敏感性；筛选出针对ATP6L的有效干扰片段；在MCF-7/ADR细胞中，ATP6L的表达下调可以碱化溶酶体并改变药物分布：ATP6L的有效干扰片段与化疗药物Dox或VCR或5-FU联用可以增强化疗药物对MCF-7/ADR细胞的杀伤作用及诱导凋亡作用，与化疗药物Dox联用可以增加细胞周期阻滞及caspase-3/7的活性。②ATP6L的表达下调与化疗药物Dox或VCR或5-FU联用可以增强化疗药物对Bel-7402/5-FU肝癌耐药细胞的杀伤作用及诱导凋亡作用，而对Bel-7402肝癌亲本细胞无此作用；ATP6L的过表达可增强Bel-7402/5-FU细胞对化疗药物Dox及5-FU的耐药性。③在MCF-7/ADR细胞中，下调ATP6L基因的表达可以使细胞的泌氢能力减弱；细胞中MMP-2的本底表达水平较低；细胞分泌上清中的MMP-2活性减弱；细胞的体外侵袭能力下降。
结论：⑴靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能，可以增敏弱碱性化疗药物对MCF-7/ADR乳腺癌耐药细胞及Bel-7402/5-FU肝癌耐药细胞的杀伤作用。⑵靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能，可以抑制MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭能力。