口腔鳞癌细胞EGFR的表达与顺铂敏感性关系的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liaotianeryi
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背景:口腔鳞癌(oral squamous cell cancer,OSCC)目前以外科手术为主,辅以术前术后的化疗,术前化疗可以提高手术切除率,降低局部复发率和减少淋巴结转移率。顺铂是鳞癌化疗的一线药物,但是目前鳞癌肿瘤细胞显示出越来越明显的耐药趋势。内皮生长因子受体(endothelial growth factorreceptor,EGFR)是一种具有酪氨酸激酶活性的膜表面传感器,在人类的多种恶性肿瘤中表达增高[3]。RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是近10年出现的一种研究基因功能和进行基因治疗的新方法,是外源双链RNA(dsRNA)分子在mRNA水平沉默靶基因,阻断基因的表达。由于RNAi具有序列特异性和高效性,且抑制作用强,稳定性高,细胞摄取相对容易,目前已成为一种全新的抗肿瘤基因治疗的有效手段。   目的:探讨口腔鳞癌细胞中EGFR表达水平与顺铂敏感性之间的关系。   方法:设计制备针对EGFR基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),转染口腔鳞癌CAL27细胞株,采用RT-PCR法检测EGFR mRNA的表达水平,Western Blot方法测定EGFR蛋白的表达。使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)。   结果:(1)siRNA转染后鳞癌CAL-27细胞中EGFR mRNA的表达各组细胞的mRNA经RT-PCR后可见明显条带,长度在262bp,与EGFR mRNA大小相符。siRNA转染组电泳带亮度明显弱于未转染对照组和转染空质粒组,siRNA组与未转染对照组和转染空质粒组相比差异有显著性(P<0.05)。(2)siRNA转染后CAL-27细胞中EGFR蛋白的表达 Western印迹法检测各组细胞EGFR蛋白表达,结果显示:siRNA组,未转染对照组和转染空质粒组的EGFR蛋白质表达量有明显差异(P<0.05)。(3)MTT检测细胞对顺铂的半数抑制浓度各组细胞转染后暴露于顺铂48h后各组细胞存活率均随顺铂浓度的增加而降低,转染前正常对照组CAL-27/DDP的IC50(14.36±0.05)μg/ml,转染后,空质粒转染组IC50为(14.01±0.16)μg/ml,特异性转染组IC50为(5.21±0.16)μg/ml。siRNA转染后的细胞对顺铂的敏感性提高了约2.2倍,特异性转染组细胞与其他两组相比差异具有显著性(P<0.05),而空质粒转染组与正常对照组相比无明显差异(P>0.05)。   结论:针对siRNA能有效抑制口腔鳞癌细胞EGFR mRNA和蛋白的表达,并能恢复鳞癌细胞对顺铂的敏感性。
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