【摘 要】
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背景和目的乳腺癌的发生在女性恶性肿瘤中最为多见,其高侵袭性、高转移性一直备受人们的关注。CD44st是透明质酸(HA)受体CD44家族成员之一,在多种肿瘤细胞中都有表达,其与配体透明质酸结合调节多种生物学过程。研究发现,HA-CD44st在乳腺癌的侵袭转移中起着重要作用,但其具体作用机制尚需进一步研究。转化生长因子-β(TGF-β)是一个新发现的TGF-β超家族,在调控细胞增殖、分化和转移中起着重
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背景和目的乳腺癌的发生在女性恶性肿瘤中最为多见,其高侵袭性、高转移性一直备受人们的关注。CD44st是透明质酸(HA)受体CD44家族成员之一,在多种肿瘤细胞中都有表达,其与配体透明质酸结合调节多种生物学过程。研究发现,HA-CD44st在乳腺癌的侵袭转移中起着重要作用,但其具体作用机制尚需进一步研究。转化生长因子-β(TGF-β)是一个新发现的TGF-β超家族,在调控细胞增殖、分化和转移中起着重要作用。由于其广泛而重要的生物学作用,其信号通路已成为许多领域的研究热点。PI3K/Akt是TGF-β下游的重要信号通路,对促进肿瘤细胞的侵袭和转移具有重要作用。同时,有研究报道TGF-β是HA-CD44介导的信号传导途径中的靶蛋白。因此,有必要研究HA-CD44st对于TGF-β的表达以及下游PI3K/AKT信号通路分子活性的影响,并探讨上述过程对于肿瘤细胞侵袭力变化的作用;为针对CD44st、TGF-β的分子靶向治疗奠定基础。方法应用脂质体转染法将真核表达载体pc DNA3.1-CD44st瞬时转染入MCF-7细胞中,以该转染细胞株MCF-7/CD44st为基础,探讨HA-CD44st→TGF-β→PI3K细胞信号通路的激活对MCF-7细胞株侵袭行为的影响;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD44st和TGF-βm RNA表达变化;Western blot及流式细胞技术(FCM)检测CD44、TGF-β、AKT和p-AKT蛋白表达变化;凝胶迁移迟滞实验(EMSA)检测转录因子AP-1与DNA的结合活性;Transwell侵袭实验检测该通路激活对MCF-7细胞侵袭力的影响。结果pc DNA3.1-CD44st转染MCF-7细胞后,CD44st m RNA和CD44蛋白均高度表达;透明质酸(HA)处理后,MCF-7/CD44st细胞中TGF-β表达明显增加,同时伴有下游信号分子p-AKT表达显著增加;EMSA检测结果表明:HA作用于MCF-7/CD44st细胞可明显增强转录因子AP-1与DNA的结合活性,但这种增强作用可被CD44封闭性单抗及PI3K信号通路抑制剂有效抑制;Transwell侵袭实验结果显示:在HA作用下,CD44st→TGF-β→PI3K信号传导通路的活化可以增加乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力。结论HA与CD44st受体结合后,可以通过CD44st→TGF-β→PI3K→AP-1信号传导通路增加MCF-7细胞的侵袭能力。
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