论文部分内容阅读
背景:胶质细胞瘤(以下简称胶质瘤)是发生于中枢神经系统最常见的一类肿瘤,其致死率较高,恶性胶质瘤患者的平均生存期仅为12个月。钙信号对调节细胞增殖和细胞周期至关重要。细胞周期G2期对维持基因组稳定性有重要的作用,但目前对调节G2期的钙信号了解仍不十分清楚。在本工作中,我们发现一类通透钙离子的、6型经典瞬时受体电势通道(TRPC6)调控细胞周期G2期和胶质瘤的生长。
方法：利用免疫印迹、免疫组织化学和原位杂交等方法比较正常人脑组织(n=17)和胶质瘤病人肿瘤组织(n=33)中TRPC6的表达水平。为了进行功能性研究,利用腺病毒载体介导的TRPC6显性负突变体和慢病毒载体介导的RNA干扰来抑制胶质瘤细胞内源TRPC6通道。利用这些分子工具进行以下实验:通过绘制细胞生长曲线、检测单细胞克隆形成能力和移植肿瘤的皮下(每组动物n=7)和颅内(每组动物n=13-15)成瘤能力来作为细胞增殖的指标；采用流式细胞和有丝分裂指数检测细胞周期变化；采用钙成像检测方法反映离子通道的功能；放射增敏实验用于检测TRPC6通道对肿瘤细胞放疗敏感性的影响。
结果：胶质瘤组织中TRPC6表达水平高于正常脑组织；阻断胶质瘤细胞内源TRPC6通道后引起一系列反应,包括钙离子内流受到抑制、Cdc25C表达下调、Cdc2失活、细胞周期被阻断在G2期,最终导致胶质瘤细胞生长受到抑制。过表达Cdc25C能够逆转Cdc2的失活。进一步的结果表明,阻断TRPC6通道能增强放射线对胶质瘤细胞的杀伤作用,并且能抑制移植的胶质瘤在裸鼠体内的生长。
结论：TRPC6通道通过调节细胞周期G2期的进程来影响胶质瘤细胞的增殖。我们的结果提示,这类离子通道有可能成为新的治疗胶质瘤的分子靶点。