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背景:铜绿假单胞菌是医院获得性感染的主要革兰阴性菌之一,耐药率高且耐药机制复杂。老年患者由于其自身特点更容易成为感染对象,治疗比较棘手。目的:1、调查老年病房铜绿假单胞菌的临床特点。2、研究老年病房铜绿假单胞菌的基因同源性,并研究铜绿假单胞菌的耐药机制。3、体外联合药敏试验验证和探索铜绿假单胞菌的临床联合用药方案。方法:1、回顾性分析我院老年病房2008-2015年各类送检标本分离的铜绿假单胞菌,统计其每年检出率、耐药率等,总结其临床特点。2、采用脉冲场凝胶电泳的方法对86株不同病人分离的铜绿假单胞菌进行基因同源性分析。PCR检测129株多耐药铜绿假单胞菌常见的ESBLs、AmpC、金属酶和OXA酶基因,分析铜绿假单胞菌耐药的分子机制。EDTA纸片法检测129株铜绿假单胞菌的金属酶表型。3、琼脂稀释法对58株多耐药铜绿假单胞菌体外联合药敏试验,联合方案包括:多黏菌素E+美罗培南,头孢吡肟+环丙沙星,氨曲南+环丙沙星,环丙沙星+美罗培南,头孢吡肟+美罗培南,氨曲南+美罗培南,头孢哌酮/舒巴坦+美罗培南。结果:1、8年间铜绿假单胞菌分离率为43.51%,排名第一;对多黏菌素和氨基糖苷类较敏感,其他类抗生素耐药率高于全国平均水平,尤其是碳青霉烯酶类其敏感率只有25%左右。不同标本来源的铜绿假单胞菌敏感率有差异。2、86株铜绿假单胞菌可分为83个基因型,基因同源性不高。129株MDRPAβ-内酰胺酶基因检出率为89.92%,碳青霉烯酶基因检出率为48.84%,氨基唐苷修饰酶基因检出率为45.74%,膜孔蛋白基因OprD2缺失率为38.76%, I类整合子基因检出率41.09%。金属酶表型阳性率27.91%。3、头孢吡肟与美罗培南联用,协同或相加率79.4%;头孢吡肟与环丙沙星联用,协同或相加率72.4%;氨曲南与环丙沙星联用,协同或相加率52.7%;氨曲南与美罗培南联用,协同或相加率41.4%;多黏菌素E与美罗培南联用,协同或相加率31%;环丙沙星与美罗培南联用,协同或相加率17.8%;头孢哌酮/舒巴坦与美罗培南联用,协同或相加率13.8%。7种联合方案中都没有表现出拮抗作用。结论:1、我院老年病房铜绿假单胞菌分离率耐药率高于全国平均水平,分离于尿标本的PA比分离于呼吸道和血液的PA敏感。2、老年病房铜绿假单胞菌基因同源性不高。多耐药铜绿假单胞菌耐药机制为膜孔蛋白缺失、产各类β-内酰胺酶、产氨基糖苷修饰酶,Ⅰ类整合子参与介导等各种机制共同作用结果。3、头孢吡肟联合美罗培南或环丙沙星效果较好;氨曲南与环丙沙星或美罗培南联用效果一般;美罗培南与环丙沙星或头孢哌酮/舒巴坦联用效果不佳。