【摘 要】
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该文将染色体微切微克隆方法应用于水稻基因组研究,结果如下:1、应用显微切割方法分离了水稻1号染色体,水稻4号染色体和水稻4号染色体端粒区,经连接接头PCR(LA-PCR),使fg级DN
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该文将染色体微切微克隆方法应用于水稻基因组研究,结果如下:1、应用显微切割方法分离了水稻1号染色体,水稻4号染色体和水稻4号染色体端粒区,经连接接头PCR(LA-PCR),使fg级DNA体外扩增到μg级,成功的构建了水稻1号染色体,4号染色体和4号染色体端粒区特异性DNA文库.2、对水稻4号染色体BAC克隆上公布序列设计套式PCR引物,经实验证明,该引物在水稻4号微切染色体中能扩增出分子量特异的单一条带.3、以水稻4号染色体短臂RFLP分子标记FR2373公布序列设计特异性引物,采用PCR法对水稻4号染色体端粒区文库中的500个阳性克隆进行筛选;以水稻1号染色体sd-1基因两侧RFLP分子标记RG109和RZ161引物特异性扩增产物为探针,采用微阵列法对水稻1号染色体微切微克隆文库中的240个克隆子进行筛选;未得到特异性克隆子.分析表明,由于筛选的克隆数目少和存在不定期的假阳性,从文库中筛选特异性片段需要进一步扩大筛选克隆的数目.下一步我们将采用微降列法杂交法进行大规模的克隆筛选.
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