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普遍存在于饲料中的β-葡聚糖不能被非反刍动物所消化，这样不仅影响饲料利用率和动物生长速率而且造成环境污染。在饲料中添加β-葡聚糖酶能有效降解β-葡聚糖的抗营养作用。利用转基因技术制备能在消化道中表达β-葡聚糖酶的转基因动物为解决抗营养因子的问题提供了一条新的途经。本论文内容如下：
1、采用芽孢杆菌β-1，3-1，4葡聚糖酶基因(Glu)，人工合成包括86bp猪腮腺分泌蛋白信号肽序列和部分重叠Glu序列的DNA片段，通过重组PCR的方法将猪腮腺分泌蛋白信号肽与Glu基因连接，得到693bp的分泌型Glu基因。通过NheⅠ和HindⅢ酶切位点连接到真核表达载体pcDNA3.1(-)，构建真核表达载体Glu-pcDNA。通过脂质体介导瞬时转染中国仓鼠卵母细胞(CHO)，并收集转染72h后的细胞上清液。用DNS法检测上清中葡聚糖酶的活性。结果显示，在转染72h的CHO细胞上清液中测得葡聚糖酶酶活为352.333 mU/mL。
2、从长白猪耳朵组织中提取DNA，克隆出2.5kb的胰腺α淀粉酶启动子(Amy)，通过NheⅠ和XhoⅠ酶切位点连接入携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的PGL-3载体中，构成Amy-GFP-PGL载体，通过PEI介导方法瞬时转染到小鼠胰腺腺泡癌细胞(MPC-83)中检测Amy的转录活性，结果显示在荧光显微镜下未见有绿色荧光，RT-PCR检测有弱的GFP扩增条带，表明Amy启动子活性较低。
3、通过PCR从载体上克隆人肠道粘蛋白MUC2启动子并引入ClaⅠ和XbaⅠ酶切位点，用酶切的方法替换含有Glu基因的慢病毒载体LV上的CMV启动子，构建MUC2-Glu-LV细胞特异性表达载体。采用PEI法瞬时转染到人结肠癌细胞(SW480)中，收集转染72h后的细胞上清，用DNS法检测上清中葡聚糖酶的活性。结果显示，在转染72h的SW480细胞上清液中测得葡聚糖酶酶活为67.037 mU/mL。
4、构建了带有Glu基因的慢病毒质粒CMV-Glu-LV，与其他三个包装质粒共同转染到293T细胞中进行包装，收集转染48h的病毒液对其进行滴度测定，并用其感染293T细胞，收集感染6天后的细胞上清，用DNS法分别检测病毒液和感染后的293T细胞上清中葡聚糖酶的活性。结果显示，病毒液的葡聚糖酶酶活为809.12mU/mL，感染后的293T细胞上清酶活性为48.32 mU/mL。病毒滴度为1.2×105 ifu/mL。
本实验成功构建了肠道组织特异性表达葡聚糖酶载体，为制备肠道表达葡聚糖酶的转基因猪打下了基础。