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目的：通过检测柯萨奇病毒B3(Coxsackie virus B3，CVB3)感染“非饥饿法”与“饥饿法”人宫颈癌细胞株(Henrietta Lacks strain ofcancer cells，Hela)后不同时间点的细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)及细胞内CVB3外壳蛋白、哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mammaliantarget of rapamycin，mTOR)、核糖体蛋白S6激酶(ribosomal proteinS6 kinase，p70S6K)mRNA水平，探讨细胞周期的不同时相对mTOR信号通路的影响及CVB3对Hela细胞mTOR/p70S6K mRNA表达的调控作用。
方法：实验分病毒组和对照组。病毒组以CVB3分别感染“非饥饿法”与“饥饿法”Hela细胞3h、6h、9h、12h、24h；对照组以病毒维持液培养。通过相差显微镜观察细胞形态学变化，用RT-PCR、Real-Time PCR检测Hela细胞内不同时间点的CVB3外壳蛋白、mTOR、p70S6K mRNA表达，应用SPSS18.0统计软件对数据进行统计学分析，P<0.05为差异有统计学意义。
结果：⑴CVB3感染不同方法培养的HeLa细胞的细胞形态改变：“非饥饿法”和“饥饿法”病毒组感染6 h时，即可见细胞病变；随着感染时间的延长，病变效应越明显。⑵RT-PCR检测Hela细胞CVB3外壳蛋白mRNA表达：“非饥饿法”与“饥饿法”的病毒组均随感染时间的延长，CVB3外壳蛋白mRNA表达逐渐增加(P<0.05)；各时间点“非饥饿法”与“饥饿法”比较，差异无统计学意义(P>0.05)。⑶RT-PCR和Real-Time PCR检测mTOR、P70S6K mRNA表达：RT-PCR和Real-Time PCR结果均显示，“非饥饿法”mTOR、P70S6KmRNA表达在病毒组感染12h时明显下调，与对照组比较，差异有统计学意义(P<05)；感染3h、6h、9h时间点与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；而“饥饿法”病毒组mTOR、P70S6K mRNA表达均低于对照组各对应时间点，差异有统计学意义(all P<0.05)；两种方法培养的Hela细胞在感染24h时RT-PCR未检测到mTOR、P70S6K mRNA表达，而Real-Time PCR检测到极低的表达。⑷“非饥饿法”与“饥饿法”的Hela细胞mTOR、P70S6K mRNA表达的比较：RT-PCR和Real-Time PCR结果均显示，病毒组和对照组Hela细胞在各时间点mTOR mRNA表达“饥饿法”均高于“非饥饿法”，差异有统计学意义(all P<0.05)；p70S6K mRNA表达“饥饿法”均高于“非饥饿法”，但差异无统计学意义(P>0.05)。
结论：①“非饥饿法”和“饥饿法”病毒组mTOR、p70S6K mRNA表达均低于对照组，提示CVB3可诱导Hela细胞mTOR、p70S6K mRNA表达下调。②CVB3感染12h、24h时，CVB3外壳蛋白mRNA的表达明显增加，而mTOR、P70S6K mRNA表达明显下调，且CVB3感染24h时，CVB3外壳蛋白mRNA高表达，但无mTOR、p70S6K mRNA表达或表达极低，提示mTOR信号通路可能参与了CVB3诱导的Hela细胞凋亡。③CVB3感染“非饥饿法”Hela细胞，病毒组仅在12h、24hmTOR、p70S6K mRNA表达与对照组比较差异有统计学意义；而“饥饿法”病毒组各时间点与对照组比较均有统计学意义；“饥饿法”病毒组和对照组Hela细胞mTOR、p70S6K mRNA表达均高于“非饥饿法”，提示细胞周期的不同时相对mTOR信号通路有影响，“饥饿法”可减少因细胞周期时相对实验的干扰，优于“非饥饿法”。