论文部分内容阅读
[目的]:
应用Ad-Easy腺病毒载体系统构建携带抑癌基因PTEN的重组腺病毒表达载体。为进一步研究PTEN基因应用于癌症基因治疗提供实验基础。
[方法]:
用插入有抑癌基因PTEN和绿色荧光蛋白的穿梭载体pAdTraek-CMV转化已经含有腺病毒骨架载体 pAdEasyl 的 Ecoli BJ5183(Ad-1 cells)进行同源重组，获得重组腺病毒质粒，经Pac Ⅰ线性化后，转染293细胞。Westernblot检测PTEN蛋白的表达。通过感染293细胞测定病毒滴度，感染MCF-7乳腺癌细胞测定病毒转染效率。感染人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM作Ad-PTEN功能的检测。
[结果]:
得到重组腺病毒表达载体Ad-PTEN，转染重组腺病毒DNA的293细胞出现细胞病变，经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因PTEN，荧光显微镜下能观察到293细胞内有绿色荧光。在293细胞内，Western blot检测到特异野生型PTEN蛋白的表达。获得高滴度的重组腺病毒感染MCF-7转染乳腺癌细胞，效率可达80％～90％。Ad-PTEN 能抑制人高转移卵巢癌HO-8910PM增殖、迁移以及诱导凋亡。
[结论]:
腺病毒Ad-Easy 系统能比较简便、快速地构建重组腺病毒，且生成的病毒滴度高、感染效率高。由于其安全性也高，故为基因治疗较为理想的载体。为进一步研究PTEN基因应用于癌症基因治疗提供实验基础。