人胎胰岛样细胞团体外增殖条件的研究

• 作 者: 夏冬
• 机 构: 西南医科大学
• 出 处: 泸州医学院 西南医科大学
• 发表日期: 2003年期
• 关键词: 胰岛样细胞团 脐血清 生长激素 肝细胞生长因子 烟酰胺 细胞增殖 胰岛细胞移植

目的：本实验通过观察人脐血清(UCS)、生长激素(GH)、烟酰胺(NIC)、肝细胞生长因子(HGF)以及小牛血清(FCS)等多因子对人胎胰胰岛样细胞团(ICCs)在体外增殖的作用，比较其协同作用，筛选并确定最佳的因子组合，为进一步研究人胎胰岛体外增殖及同种胰岛细胞移植提供理论依据和实验数据。
方法：(1)取水囊引产分娩的胎儿(胎龄14～32周)胰腺组织，胶原酶消化法制备ICCs。(2)用24孔培养板培养上述制备的ICCs，加入10％小牛血清(FCS)，作为Ⅰ组；加入生长激素(GH，100ng/ml)+肝细胞生长因子(HGF，25mg/ml)+烟酰胺(NIC，10mmol/L)的因子组合作为Ⅱ组；加入10％脐血清(UCS，vol/vol)作为Ⅲ组；最后在Ⅱ组的基础之上加入10％UCS作为Ⅳ组。(3)24小时转板后继续培养，间日调换培养液，台盼兰染色计数细胞存活率、二硫腙(DTZ)染色计数B细胞数量，同时放射免疫法测定胰岛素分泌量，并于培养第6天末收集细胞，冻融萃取测定细胞内胰岛素含量，并应用形态学方法和透射电镜观察胰岛细胞的生长特性。
结果：(1)UCS、GH+NIC+HGF以及UCS+(GH+NIC+HGF)均能够有效促进人眙胰岛B细胞的体外增殖，ICCs的获得量分别是FCS组的4倍、2倍和5倍，以UCS+(GH+NIC+HGF)因子组合的作用最为明显。(2)在各组实验中，我们都观察到了胰岛素分泌量的逐步下降。其中以FCS组的下降最明显，GH+NIC+HGF组及UCS组次之，而UCS+(GH+NIC+HGF)因子组合的胰岛素分泌量下降最少，其胰岛素含量亦最高。
结论：GH、HGF及NIC均为重要的生长因子，UCS分离自人类胎儿、用于同种细胞的组织培养。当其共同作用于人胎胰岛细胞的体外培养时，具有交互作用，能明显促进胰岛B细胞的增殖，显著提高ICCs的获得率、胰岛素分泌量。