【摘 要】
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该文通过PCR技术扩增得到GC含量很高的fdr1(75﹪)和fdr2（68﹪）基因片段,对二者编码的氨基酸序列进行了一系列的分析和预测,包括氨基酸的组成、亲水性分析、跨膜结构和亚细胞定位预
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该文通过PCR技术扩增得到GC含量很高的fdr1(75﹪)和fdr2（68﹪）基因片段,对二者编码的氨基酸序列进行了一系列的分析和预测,包括氨基酸的组成、亲水性分析、跨膜结构和亚细胞定位预测等,初步推测fdr1可能是一类叶绿体蛋白,而且受缺铁胁迫诱导加强表达,fdr2可能是内质网膜上参与分泌的一类蛋白质.经同源性比较发现,fdr2和一类超敏感反应分泌蛋白HRP（HypersensitivityResponseSecretionProtein）基因的核苷酸同源性达到82﹪.为进一步研究,将fdr1和fdr2分别构建到原核表达载体pGEX-2T和pET-32a上,试图利用E.coli诱导表达蛋白制备抗体,通过Western杂交对二者进行亚细胞定位以及基因表达调控的研究.同时将二者分别亚克隆到植物表达载体pBI121上,构建了二者的正义表达重组质粒pBF和pBH,以农杆菌介导的叶盘法转化烟草植株,进行组织培养,继代四次后获得Km抗性植株pBF58株、pBH34株,土培长到约5～6片叶子时提取烟草基因组DNA进行PCR鉴定和Southern杂交鉴定.经PCR扩增检验得到pBF阳性植株32株,pBH阳性植株18株.以fdr2为探针对上述PCR阳性植株做进一步Southern杂交鉴定,同时为了检测fdr2在不同物种间的分布,还将fdr2分别与仙鹤藓、小麦、水稻、拟南芥、苹果、烟草的基因组DNA进行Suthern杂交.
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