【摘 要】
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对虾白斑综合症病毒(WSSV)是危害养殖对虾的主要病原,致病能力强,传播范围广,给世界对虾养殖业造成了巨大的损失,至今依然没有有效的防治方法。本文围绕病毒膜蛋白开展研究,
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对虾白斑综合症病毒(WSSV)是危害养殖对虾的主要病原,致病能力强,传播范围广,给世界对虾养殖业造成了巨大的损失,至今依然没有有效的防治方法。本文围绕病毒膜蛋白开展研究,此外,还对病毒的极早期基因启动子进行了初步的筛选鉴定。研究工作主要包括以下几个方面:(1)本文对WSSV膜蛋白VP52B进行了鉴定和功能分析。该蛋白是病毒基因wsv256的编码产物。在E.coli BL-21菌株中表达了GST-VP52B,并制备了相应的抗血清。GST pull-down分析发现VP52B能与另一个病毒膜蛋白VP26相互作用。之前的研究认为VP26是重要的连接蛋白,为了确定该蛋白与VP52B的结合位点,表达了不同长度的VP26突变体,并发现VP26和VP52B相互作用的位点位于VP26 135～170Aa。(2)通过超声法将WSSV基因组随机断裂至400～900bp DNA片段,并插入PIZ△IE/V5-EGFP载体以构建文库,转染昆虫细胞Hi5后,发现其中部分细胞有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,说明这部分细胞中的DNA片段可能具有极早期启动子活性。这对于进一步筛选和鉴定WSSV极早期基因及开展极早期启动子研究具有重要意义。(3)从WSSV基因组中选择了20多个有锌指结构域或其他转录调控相关结构域的基因,克隆其上游400～500bp的启动子序列,连接到检测启动子活性的载体中。转染昆虫细胞Hi5发现有两个ORF(ORF249、ORF403)上游序列具有较强的启动子活性。这两个ORF序列分析发现,它们都具有Ring-H2 finger motif,因此推测这种结构特点与WSSV极早期基因启动子活性相关。
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