论文部分内容阅读
背景：近年来的研究证实，在高血压、冠心病等心血管疾病发生与发展的不同阶段，炎症是一个主要的、共同的病理生理学特征。心血管疾病往往是一种以血管内皮细胞损伤、单核/巨噬细胞浸润为特征的慢性炎症反应性疾病。因此控制炎症可能是当今治疗这些疾病的有前途的方法之一。目前研究表明，瞬时受体电位香草醛亚型1受体（TRPV1）能够抑制炎症，在炎症状态下对机体有保护作用。中药吴茱萸作为治疗心血管疾病的常用中药已有一定历史，多方面的研究结果提示其有效成分吴茱萸（EVO）可能为 T R P V1受体激动剂。因此，进一步揭示 T RV1受体在炎症中的作用，探讨 TRPV1受体对 M2型巨噬细胞功能的调控作用及吴茱萸碱的干预作用，对心血管疾病等慢性炎症反应性疾病的治疗具有重要的临床意义。 目的：本实验在人单核细胞白血病细胞（THP-1）培养模型上，利用白介素-4（IL-4）诱导 THP-1分化为 M2型巨噬细胞，通过观察 TRPV1受体对 M2型巨噬细胞表型相关指标的影响，以及吴茱萸碱对该过程的影响作用，从而阐明TRPV1受体对 M2型巨噬细胞功能的调控作用及吴茱萸碱的干预作用，为进一步揭示 T RP V1受体及吴茱萸碱的抗炎作用奠定基础。 方法： 1.实验分组及干预：将对数生长期的THP-1以3×105个/孔密度铺细胞于6孔板，以2ml RPMI1640＋10％FBS培养基培养。待细胞长至80%以上开始进行分组加药刺激，具体分组如下： 1）Vehicle组：加入 vehicle使其终浓度为1/2000; 2）IL-4组：加入 IL-4使其终浓度为10ng/ml; 3）CAP+IL-4组：分别加入Capsaicin和IL-4使其终浓度分别10umol/L和10ng/ml; 4）CAPZ+CAP+IL-4组：分别加入 Capsazepin、Capsaicin和IL-4使其终浓度分别为10umol/L、10umol/L和10ng/ml; 5）EVO+IL-4组：分别加入 EVO和IL-4使其终浓度分别为10umo l/L和10ng/ml; 6）CAPZ+EVO+ IL-4组：分别加入 Capsazepin、EVO和IL-4使其终浓度分别为10umol/L、10umol/L和10ng/ml; 各组细胞在37℃5％C02条件下培养12 h。培养处理后，取上清液及细胞成分，进行相关指标测定。 2.观察指标 1）酶联免疫吸附试验（E LIS A）检测 T GF-β1的产生; 2）RT-PCR检测细胞目的基因 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表达; 3) Western blot检测 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表达。 结果： 1.酶联免疫吸附试验（ELISA）检测 TGF-β1的产生：与 Vehic le组相比，经 IL-4诱导的M2型巨噬细胞，其细胞因子 TGF-β1的产生明显增加，利用 C AP特异性激活 TRP V1受体后能明显降低 TGF-β1的产生，且该作用可被 TRPV1受体拮抗剂CAPZ部分拮抗。 2. RT-PCR检测细胞目的基因 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表达：与 Ve hic le组相比，经 I L-4诱导的M2型巨噬细胞，其表面特定标志分子 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表达明显增加，利用 CAP特异性激活 TRPV1受体后能明显降低 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表达水平，且该抑制作用可被 TRPV1受体拮抗剂 CAPZ所拮抗。 3. Western blot检测 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表达：与 Ve hic le组相比，经 I L-4诱导的M2型巨噬细胞，其表面特定标志分子 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表达明显增加，利用 CAP特异性激活 TRPV1受体后能明显降低 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表达水平，且该抑制作用可被 TRPV1受体拮抗剂 CAPZ所拮抗。 4.通过吴茱萸碱干预后可明显降低 I L-4所诱导的M2型巨噬细胞的功能，其主要表现为 TGF-β1产生下降、Arginase-1、Mannose Receptor mRNA和蛋白表达水平下降，并且该抑制作用可被 TRPV1受体拮抗剂 CAPZ所拮抗。 结论： 1.在 THP-1细胞培养模型上，激活 TRPV1受体后能明显降低 IL-4诱导的M2型巨噬细胞表型相关指标的表达，且该作用可被 T RP V1受体拮抗剂所阻断，提示 T RP V1受体可调控 M2型巨噬细胞的功能。 2.在 THP-1细胞培养模型上，吴茱萸碱能明显降低 I L-4诱导的M2型巨噬细胞表型相关指标的表达，且该作用可被 TRP V1受体拮抗剂所阻断，提示吴茱萸碱可能通过激活 T RP V1受体调控 M2型巨噬细胞的功能。