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研究目的和背景:
鼻咽癌是我国南方地区常见的头颈部恶性肿瘤之一,常规放射治疗后,5年生存率约40-70%,治疗失败的主要原因是局部复发和远处转移。因此寻找判断鼻咽癌预后相关的分子指标有助于早期检测,指导综合治疗,从而提高生存率和生存质量。近年来研究发现Id1蛋白在乳腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌、小细胞肺癌、胃癌、食管癌、鼻咽癌等多种肿瘤中高表达,且与患者预后密切相关。
本研究旨在运用免疫组织化学染色技术和Western blot法,检测鼻咽癌和鼻咽慢性炎症组织中Id1的表达水平,探讨其与鼻咽癌分期、临床相关因素及预后之间的关系。
材料和方法:
1、鼻咽癌石蜡组织标本和新鲜组织标本
收集中山大学附属二院和广州医学院附属肿瘤医院2000年1月至2004年7月收治的鼻咽癌患者的石蜡组织标本88例,其中男性71例、女性17例,年龄24-78岁,平均年龄52.79±11.48岁。鼻咽癌分期采用福州92分期标准,病理诊断为低分化鳞癌85例,未分化型3例,全部病例随访时间超过5年。取鼻咽慢性炎症组织20例作为对照组。
收集中山大学附属二院鼻咽癌新鲜组织标本5例,鼻咽慢性炎症新鲜组织标本2例。
2、主要试剂
兔抗人Id1蛋白多克隆抗体(SC-488 Santa Cruz公司)、GAPDH一抗(BM1623武汉博士德生物工程有限公司)、二步法免疫组化检测剂兔二抗(PV-6001北京中杉金桥生物技术有限公司)、DAB显色液(ZLI-9017北京中杉金桥生物技术有限公司)、苏木素(ZLI-9039北京中杉金桥生物技术有限公司)。
3、实验方法
采用免疫组织化学染色二步法和Western blot法检测鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织中Id1蛋白的表达水平。
4、统计学处理
计量资料的数据表示为均数士标准差。计数资料比较采用四格表资料的Fisher's精确概率法检验或R×C表资料的x2检验。相关分析采用Spearmanrank test。生命曲线用Log-Rank检验,应用COX模型对生存资料进行多因素分析。所有数据均采用SPSS13.0软件分析。
结果:
1、88例鼻咽癌组织中Id1阳性73例,表达率82.95%,20例鼻咽慢性炎症组织中Id1阳性3例,表达率15%,两组相比差异有统计学意义(x2=36.092 P=0.000),结果显示Id1在鼻咽癌组织中的表达率明显高于鼻咽慢性炎症组织。
2、鼻咽癌组织中Id1表达与肿瘤T分期、N分期、临床分期明显相关(P<0.05),与年龄、性别无相关性(P>0.05)。
3、73例鼻咽癌病人(初诊无远处转移)中,存活时间超过5年的有48例(65.75%),其中59例Id1阳性的病人中,存活时间超过5年的有35例(59.32%),14例Id1阴性的病人中,存活时间超过5年的有13例(92.86%),两组相比差异有统计学意义(P=0.026),结果显示Id1表达阳性的鼻咽癌病人预后差。
4、Id1蛋白的表达水平与鼻咽癌肿瘤局部和区域淋巴结复发、远处转移和5年无瘤生存无明显相关性(P>0.05)。
5、鼻咽癌临床分期可作为肿瘤预后的独立预测因子(P<0.05),Id1蛋白的表达水平不能作为鼻咽癌预后的独立预测因子(P>0.05)。
6、Id1蛋白在2例鼻咽慢性炎症组织中的表达水平低于在5例鼻咽癌组织中的表达水平(P=0.021)。
结论:
1、Id1在鼻咽癌组织中的表达水平明显高于鼻咽慢性炎症组织。Id1在鼻咽癌中的表达水平与与肿瘤T分期、N分期、临床分期明显相关,与年龄、性别无关。
2、Id1的表达水平与鼻咽癌病人的5年生存时间有关,Id1表达阴性的病人预后好,Id1表达阳性的病人预后差。Id1蛋白的表达水平与鼻咽癌肿瘤局部和区域淋巴结复发、远处转移和5年无瘤生存无明显相关性。