论文部分内容阅读
目的:研究miR-126在体内是否具有抑制结肠癌细胞增殖、侵袭转移的作用及miR-126对CXCR4及RhoA信号通路是否具有调控作用。 方法:1.利用慢病毒载体构建稳定过表达miR-126的结肠癌细胞系HCT116及稳定沉默miR-126的结肠癌细胞系SW480。 2.利用稳定过表达miR-126的结肠癌细胞系HCT116及稳定沉默miR-126的结肠癌细胞系SW480进行裸鼠皮下、尾静脉成瘤实验。 3.realtime PCR检测稳定过表达及沉默miR-126的结肠癌细胞系中CXCR4及RhoA信号通路重要分子的表达。 4.利用原位杂交技术检测人结肠癌组织芯片癌及癌旁正常黏膜中miR-126的表达，免疫组化技术检测人结肠癌组织芯片癌及癌旁正常黏膜中CXCR4及RhoA信号通路重要分子的表达，分析各分子的表达与结肠癌临床病理特征之间的关系，并进行miR-126与CXCR4及RhoA通路重要分子表达的相关性分析及生存分析。 结果:1.miR-126在HCT116过表达实验组中的表达较对照组上调5.08倍(P＜0.05)，在SW480沉默实验组中的表达为其对照组的0.128倍(P＜0.05)，稳定过表达miR-126细胞系HCT116、稳定沉默miR-126细胞系SW480构建成功。 2.裸鼠皮下成瘤实验结果表明过表达miR-126实验组皮下移植瘤瘤体平均体积明显小于其对照组瘤体体积(P＜0.05)，稳定沉默miR-126实验组皮下移植瘤瘤体平均体积明显大于其对照组瘤体体积(P＜0.05)。尾静脉成瘤组中稳定过表达miR-126实验组肺部转移灶的平均数目、面积均明显小于其对照组(P＜0.05)，稳定沉默miR-126实验组肺部转移灶的平均数目、面积均明显大于其对照组(P＜0.05)。 3.realtime PCR结果表明在稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116实验组中CXCR4、RhoGEF的表达较其对照组明显下调，ARHGAP5的表达较其对照组明显上调(P＜0.05);在稳定沉默miR-126细胞系SW480实验组中CXCR4、RhoGEF的表达较其对照组明显上调，ARHGAP5的表达较其对照组明显下调(P＜0.05)。 4.原位杂交结果显示miR-126在人结肠癌组织中的表达较癌旁正常黏膜表达明显下调(P＜0.05)，且miR-126的表达与结肠癌临床分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05);免疫组化结果示CXCR4及RhoA信号通路重要分子RhoA、RhoGEF、RhoGAP、ROCK、PI3K、PAK1、PKN1在人结肠癌组织中的表达较癌旁正常黏膜组织均明显上调(P＜0.05)，且CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK、PI3K的表达与结肠癌临床分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05)，RhoGAP、PAK1、PKN1的表达与各项临床病理特征均无关(P＞0.05)。相关分析结果显示miR-126的表达与CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK的表达明显负相关(P＜0.05)，与RhoGAP、PAK1、PKN1、PI3K的表达无明显相关关系(P＞0.05);CXCR4的表达与RhoA、RhoGEF、ROCK的表达明显正相关(P＜0.05)，与RhoGAP、PAK1、PKN1、PI3K的表达无明显相关关系(P＞0.05)。生存分析结果显示miR-126阳性表达组结肠癌患者生存率明显高于阴性表达组，CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK阳性表达组患者生存率明显低于阴性表达组患者(P＜0.05)，RhoGAP、PAK1、PKN1、PI3K的表达与结肠癌患者生存率无明显关系(P＞0.05)。 结论:1.成功构建稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116、稳定沉默miR-126结肠癌细胞系SW480，通过裸鼠移植瘤实验证实miR-126在体内具有抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移的作用。 2.在结肠癌中miR-126可能通过负调控CXCR4及RhoA信号通路而抑制结肠癌的侵袭转移。