多杀霉素高产菌株快速筛选模型的建立

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由多赤糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosad)发酵产生的多杀霉素是一种新型杀虫剂。它具有高效、低毒、低残留和利于环保等优点。本课题就多杀霉素的发酵生产进行了研究,并确立了S. spinosad发酵生产多杀霉素的快速筛选模型。 对高效液相色谱法(HPLC)分析多杀霉素的含量进行研究,确定最佳分析条件为流动相:甲醇∶乙腈=2∶1,流速:1ml/min。 采用紫外诱变、DES诱变和60Coγ诱变育种,获得一株产量提高了3.90倍的菌株。通过2—脱氧葡萄糖对其进行定向筛选,最终得到一株高产菌AS—216,其产量可达135.76mg/L,比原始菌株的产量提高了5.5倍。 以AS—216为出发菌,对发酵培养基以及培养条件进行了优化。确立其最佳发酵工艺条件,发酵培养基:葡萄糖6.0%,棉子粉1.0%,豆油2%,酵母浸膏0.02%,K2HPO4 0.05%,NaCl 0.05%,CaCO3 0.5%。最佳发酵条件为:250ml三角瓶装50ml,起始pH为7.0,培养温度为30℃,接种量为:5%,转速240r/min。在此条件下,多杀霉素浓度达到142.93mg/L,是优化前产量的1.17倍。 研究产量差异大的高产菌株和低产菌株的各种生物学特性,发现通过油脂水解平板的颜色以及发酵液的酸价,与菌株的发酵单位有直接相关性,从而建立了快速筛选模型。 最后,本文采用选育出的刺糖菌素高产菌AS—216和优化后的发酵条件进行了10L罐放大研究。对多杀霉素的发酵曲线进行了初步的研究。
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