拟南芥LBD29调控基因的鉴定与功能研究

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LBDs(Lateral Organ Boundaries Domain)是植物特有的一类转录因子,对于植物侧生器官发育至关重要。近年来研究发现LBDs参与调控了植物侧根发育、叶发育、愈伤组织形成和氮代谢等过程。然而目前对于LBDs调控器官发育和愈伤组织形成的分子机制知之甚少。  实验室前期研究表明过表达LBDs诱导形成自发的愈伤组织。为了进一步研究LBDs调控愈伤组织形成以及器官发育的分子机制,本论文以ProXVE:LBD29转基因植株为研究材料,利用RNA-seq技术,获得了LBD29调控的差异表达基因。我们在通过RT-PCR验证了RNA-seq数据的可靠性的基础上,挑选了32个基因进行了过表达构建。初步的表型分析发现:MYB109(MYB DOMAINPROTEIN109)、MYB14、HB12(HOMEOBOX12)以及AT4G13710过表达植株产生较弱的自发愈伤组织;过表达一类小的亮氨酸拉链蛋白家族基因ZPRs(LITTLE ZIPPER)导致叶片向下卷曲和SAM(Shoot Apical Meristem)异常;过表达AT5G06570导致了一级莲座叶侧枝增多、植株矮化、叶片变圆以及叶柄短缩的表型。RNA-seq数据表明AT5G06570受LBD29负调控,而AT5G06570编码一个α/β水解酶。我们进一步对AT5G06570的功能进行探索。我们检测AT5G06570在Pro35S∶LBD29转基因植株和Pro35S∶LBD16∶SRDX转基因植株中的表达量发现,AT5G06570在Pro35S∶LBD29转基因植株中表达量降低,而在Pro35S∶LBD16∶SRDX转基因植株中表达量升高;GUS染色发现,愈伤诱导培养基CIM(Callus Inducing Medium)处理后,AT5G06570表达量下降。上述结果均说明了AT5G06570受LBD29负调控。通过统计侧芽生长情况,我们发现过表达AT5G06570转基因植株的侧生分生组织起始正常,表明过表达AT5G06570影响侧芽的伸长。AT5G06570的表达模式分析显示,该基因主要在拟南芥根部和叶片的维管组织以及莲座叶侧芽中表达。通过qRT-PCR检测BRC1(BRANCHED1)和MAX4(MORE AXILLARY BRANCHING4)的表达,我们发现在Pro35S∶AT5G06570转基因植株中BRC1表达量显著降低,而MAX4表达量则升高,暗示了AT5G06570可能参与到独脚金内酯调控侧枝发育过程中。  综上所述,通过反向遗传学,我们获得了LBD29调控表达的8个候选基因,初步分析了它们在愈伤组织形成和地上器官发育方面的功能。对AT5G06570进行了较为详细的研究,结果表明AT5G06570受LBD29负调控,可能参与到独脚金内酯介导的侧枝发育的过程中。
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