猪IGF-Ⅰ、IGFBP3和IGF-ⅠR基因的多态性及表达规律的研究

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生长性状是养猪生产者十分关注的经济性状,IGF-Ⅰ、IGFBP3和IGF-Ⅰ R基因是影响猪生长发育的重要候选基因。本研究主要对在生长发育方面各具特色的蓝塘猪和长白猪的生长发育进行了比较研究,在1、27、90、150和180日龄(每阶段每品种公母各3头)进行性能、屠宰测定和样品采集(肝脏、肌肉和血液)。分别用RIA法和ELISA法测定血清中IGF-Ⅰ和IGFBP3的浓度,用实时定量PCR法检测肝脏和肌肉中IGF-Ⅰ、IGFBP3和IGF-Ⅰ R基因mRNA表达量。实验还用DNA池扩增和直接测序法分别对3个基因进行TSNP筛查,并对标记位点与性状进行关联分析。结果如下: 1、猪90日龄前优先骨骼发育,90~150日龄是肌肉生长高峰期,150日龄后大量沉积脂肪。两品种增重高峰期均在90~150日龄。蓝塘猪27日龄前生长强度较大,蓝塘猪比长白猪较早沉积脂肪。 2、蓝塘猪初生时血清中IGF-Ⅰ浓度显著高于长白猪和本品种其它阶段(P<0.05)。长白猪27日龄时最高,且显著高于蓝塘猪(P<0.05)。两品种内性别间变化规律一致。 3、两品种初生时血清中IGFBP3含量均较低,150日龄前保持较高水平,150日龄后蓝塘猪迅速下降,长白猪180日龄下降明显。在1、180日龄,蓝塘猪性别间差异显著(P<0.05),长白猪各个阶段性别间无显著差异。180日龄血清中IGF-Ⅰ含量与IGFBP3含量呈正相关(P<0.01)。 4、IGF-Ⅰ基因mRNA表达在不同日龄阶段的变化结果表明:肝脏中,蓝塘猪90日龄最高,与1日龄差异显著(P<0.05);长白猪除90日龄低于蓝塘猪外,其它各阶段均高于蓝塘猪,且在180日龄达最高峰。180日龄时两品种间差异显著(P<0.05)。各阶段两品种内性别间差异不显著。肌肉中,1日龄时两品种间差异显著(P<0.05),27、90日龄蓝塘猪均高于长白猪。蓝塘猪180日龄性别间差异显著,其它阶段差异不显著。 5、IGFBP3基因mRNA表达在不同日龄阶段的变化结果表明:肝脏中,蓝塘猪1日龄最低,与初生重呈极显著正相关(P<0.01);90日龄最高,且与1、27日龄差异显著(P<0.05)。长白猪各日龄差异不显著,同一阶段不同品种间差异不显著。蓝塘猪1日龄时显著低于长白猪(P<0.05)。肌肉中,蓝塘猪90日龄表达量与27~90日龄间日增重呈显著相关(P<0.05)。蓝塘猪1日龄性别间差异达显著水平(P<0.05),其它各阶段间差异不显著,长白猪性别间差异不显著。 6、IGF-Ⅰ R基因mRNA表达在不同日龄阶段的变化结果表明:肝脏中,两品种变化趋势一致,1日龄最低,27日龄最高。长白猪1日龄时IGF-ⅠR基因表达量与血清IGF-Ⅰ含量呈显著正相关(P<0.05);蓝塘猪180日龄时IGF-Ⅰ R基因表达量与血清IGFBP3含量呈显著正相关(P<0.05)。各阶段两品种内性别间差异不显著。肌肉中,两品种变化趋势相似,1日龄最低,150日龄最高。长白猪1日龄肌肉IGF-Ⅰ R基因表达量与肝脏IGF-Ⅰ表达量和IGF-Ⅰ R表达量均呈显著负相关(P<0.05)。蓝塘猪27日龄肌肉IGF-Ⅰ R表达量与肝脏IGFBP3表达量呈显著正相关(P<0.05)。 7、3个基因SNP筛选和关联分析表明:IGF-Ⅰ基因比较保守,在5’-UTR(1884bp)、外显子1(62bp)、内含子1(1348bp)和外显子2(24bp)共3318bp区域未筛查到SNP。IGF-Ⅰ基因外显子4多态位点与长白猪和蓝塘猪生长性状关联分析表明,两品种均缺少AA纯合子,B基因可能有利于猪早期的生长发育;对IGFBP3基因5’-UTR(569bp)和3’-UTR(707bp)共1376bp筛选得到11个SNPs,A2670G(AY422045)位点与长白猪0~100kg日增重和30~100kg日增重显著相关(P<0.05),并且GG基因型显著高于AA、AG基因型(P<0.05),G基因可能是提高日增重的有利基因;对IGF-Ⅰ R基因cDNA(1307bp)进行筛选获得3个SNPs,T469C位点与长白猪初生重存在显著相关(P<0.05)。
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