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目的： 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，尽管其早期检测技术和手术治疗方式有很大的改进，但死亡率依然很高。因此，寻找能够精确代表肿瘤生物特性、筛选高危早期胃癌患者且能判断预后的生物标志物非常重要，这些标志物将会有助于更好地实施个体化治疗。早期侵袭和转移是胃癌的重要特征以及预后不良的关键因素也是肿瘤治疗失败的主要原因，新生血管的形成是肿瘤侵袭和转移的关键步骤，肿瘤的早期局部浸润和转移倾向，依赖于周围组织的血供。因此血管生成与肿瘤有非常密切的关系，针对血管生成的抗肿瘤治疗正成为国际上的研究热点，对肿瘤血管生成因子及其间相互作用的进一步深入研究显得尤为重要。在目前的研究中VEGF和MVD是反映肿瘤新生成血管很主要的两个指标[1]。在肿瘤发生侵袭转移的过程中，无论是起始或终末阶段，细胞粘附分子在血管生成均发挥着重要的作用，但是具体的作用机制尚不完全清楚。已有粘附分子E-cadherin的异常表达可以作为评价肿瘤预后的辅助指标，同时可以诱导肿瘤血管的生成的相关报道[2]，但是鲜见关于T-cadherin与胃癌发生、发展、转移和血管生成之间的研究。因此我们拟研究粘附分子家族中的T-cadherin与VEGF、MVD这两个能够反映胃癌形成过程中血管变化的两个重要指标之间的关系，以期能够探讨T-cadherin在胃癌形成过程中其与血管生成变化之间的关系，以此为临床胃癌的诊断、指导治疗及判断预后提供依据 方法： 1.研究对象 标本来源2011年10月至2012年12月在我院住院患者手术切除的胃癌标本80例。其中男性患者55人，女性患者25人。年龄30～84岁，平均年龄57.55岁。术前均未接收抗肿瘤治疗。所有胃癌组织标本均经病理学（HE染色）证实为胃癌。癌旁组织取自距肿瘤边缘2cm以上，并经病理检查排除肿瘤可能的组织标本80例。取材后迅速制作成石蜡组织标本保存备用。 2.研究方法 采用免疫组化S-P法染色:1.取石蜡包埋的胃癌组织及相应的癌周正常组织切块，切片厚4微米，考片72度1.5小时;2.脱蜡:把切好的切片放入二甲苯中，10分钟/缸共三缸;3.脱苯水化:酒精从高到低(95％-85％-75％)各五分钟，切片放入水缸中用流水浸泡3分钟;4蒸馏水清洗两次，每次三分钟;5.抗原修复:T-cadherin和VEGF采用EDTA热修复(100度20分钟)，CD34采用高温高压修复（900ml水+82ml柠檬酸钠+18ml柠檬酸当高压锅气阀顶起时记时1分20秒后停止）6.冷却后每张切片滴一滴10％过氧化氢阻断液（试剂A），以阻断内源性过氧化氢酶的活性，室温下孵育10分钟。7..PBS液冲洗3次/3分。8.甩去PBS液，每张切片加一滴或50微升的非免疫性动物血清（试剂B），室温下孵育10分钟。9.甩去血清，每张切片加一滴或50微升的第一抗体，室温下孵育90分钟或4度冰箱过夜。10 PBS液冲洗3次/3分。11.甩去PBS缓冲液，每张切片加一滴或50微升生物素标记的第二抗体（试剂C），室温下孵育20分钟。12.PBS液冲洗3次/3分。13甩去PBS液，每张切片加一滴或50微升链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液（试剂D），室温下孵育20分钟。14.PBS液冲洗3次/3分。15甩去PBS液，每张切片加2滴或100微升新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察3-10分钟，阳性显色为棕色。当显色恰当时放入自来水中终止染色。16.自来水冲洗，苏木素复染5分钟，1％盐酸酒精分化数秒（去掉多余着色部分），自来水冲洗(5min)返蓝。17.切片经过梯度酒精(75％-85％-95％-100％)脱水，中性树胶封固。 3、结果判断 T-cadherin分子定位在细胞膜上，T-cadherin分子表达阳性细胞的细胞膜被染成棕黄色，染色结果判断方法为[3]:每张切片在100倍光镜下随机观察10个视野，400倍光镜下每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数，计算阳性细胞百分比，取平均数，并以百分数表示细胞阳性指数。阳性细胞＜10％为(-)，＞10％为(+)。VEGF以肿瘤细胞中出现棕黄色颗粒为阳性，根据细胞染色强度评分[4]a（0分:无，1分:弱，2分:中，3分:强）;和阳性细胞百分数b（0分:无，1分:1％～25％，2分:26％～50％，3分:51％～75％，4分:76％～100％）确定，a+b＞3，为阳性，＜3为阴性。CD34结果判断及MVD计算[1]:与胃癌细胞和其他组织成分有明显区别染成棕黄色细胞或细胞丛作为一个血管，只要结构不相连，分支结构也作为一个血管计算。切片先置于低倍(HPFs×100)视野下确定最高血管密度区域，然后置于高倍(HPFs×200)视野下，选择5个最高血管密度区域计数（每个视野大小为0.075mm2），再取5个区域的平均值。结果以均数±标准差表示。T-cadherin、VEGF以已证实的阳性表达的结肠癌标本为阳性对照，CD34以正常血管内皮作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性空白对照。 4.统计学分析 采用SPSS17.0统计分析软件，计量资料的比较采用两样本比较的t检验，采用均数±标准差表示;计数资料的比较采用卡方检验。各统计量均以P＜0.05为差异有统计学意义。 结果： 1、T-cadherin、VEGF和MVD在胃癌和癌旁正常胃组织中的表达:T-cadherin主要在胃癌细胞膜上表达，阳性率为45％(36/80)，而癌旁正常胃组织中T-cadherin阳性率为62.5％(50/80)。两者比较差异有统计学意义(P=0.026)。VEGF在癌旁正常细胞阳性率为28.75％，在胃癌中表达阳性率为71.25％之间差异均有统计学意义(P=0.000)。CD34阳性细胞着色部位主要是血管内皮细胞的胞膜和胞浆，胃癌中标记的微血管明显多于正常组织（54.957±7.277 vs27.5±6.096，P＜0.001） 2、胃癌中T-cadherin与VEGF、MVD表达的相关性分析:T-cadherin和VEGF蛋白表达呈负相关(P=0.001);T-cadherin阳性组的MVD值明显低于阴性低表达组(P＜0.001) 3、T-cadherin、VEGF、MVD在胃癌中的表达与临床病理特征的关系:T-cadherin、VEGF、MVD在胃癌组织中的阳性表达与患者性别和年龄、大小均无关，(P＞0.05);而与组织分化程度、淋巴结转移及pTNM分期呈明显相关(P＜0.05) 结论： 1、T-cadherin主要在胃癌细胞膜上表达，阳性率为45％(36/80)，而癌旁正常胃组织中T-cadherin阳性率为62.5％(50/80)。两者比较差异有统计学意义(P=0.026)。VEGF在癌旁正常细胞阳性率为28.75％，在胃癌中表达阳性率为71.25％之间差异均有统计学意义(P=0.000)。CD34阳性细胞着色部位主要是血管内皮细胞的胞膜和胞浆，胃癌中标记的微血管明显多于正常组织(54.957±7.277vs27.5±6.096, P＜0.001) 2、T-cadherin和VEGF蛋白表达呈负相关(P=0.001); T-cadherin阳性组的MVD值明显低于阴性低表达组(P＜0.001) 3、T-cadherin、VEGF、MVD在胃癌组织中的阳性表达与患者性别和年龄、大小均无关，(P＞0.05);而与组织分化程度、淋巴结转移及pTNM分期呈明显相关(P＜0.05) 4、T-cadherin的异常表达可以作为临床评价胃癌诊断、指导治疗及判断预后的辅助指标之一。