论文部分内容阅读
β-1,3-葡寡糖具有广泛的生物活性，首先寡糖作为一种激发子，可以诱导植物自身的免疫系统分泌植物抗生素，抵抗植物病原体的侵入。其次，葡寡糖能够调节人和动物的免疫反应，提高人和动物机体的免疫活性。此外，β-1,3-葡寡糖还能够促进人和动物分泌巨噬细胞，抗肿瘤细胞等功能。研究表明，β-1,3-葡寡糖能够通过多种识别作用，决定着人体和动植物的细胞识别，聚集及受体作用，具有广泛的应用潜力。热凝胶是天然的微生物胞外多糖，是一种不含分支的β-1,3-葡聚糖，由土壤杆菌发酵产生，产量高，价格低廉，因此以热凝胶为原料制备寡糖可以有效降低生产成本。由于热凝胶难溶于水，受到的关注较少。目前尽管已有通过热凝胶水解来获取寡糖的研究，但是得到的寡糖含量及热凝胶的利用率均较低。本文对酸水解热凝胶制备β-1,3-葡寡糖进行了研究。首先应用物理方法对热凝胶进行了预处理。其次，选择了硫酸进行热凝胶的水解，并且为了提高热凝胶的水解率又建立了二步水解的方法。通过优化水解温度和时间，结果表明，获取低聚合度寡糖（DP2–6）的较优水解条件为70°C水解6h，然后回收一步水解残留物于80°C继续水解3h，获取较高聚合度寡糖（DP7–10）较优水解条件为70°C水解4h，然后80°C水解1h。相比于单步水解，二步水解法使高聚合度寡糖的含量提高了39.1%，低聚合度寡糖含量提高了18.9%。其次，本文对热凝胶酶水解制备寡糖进行了研究。由于β-1,3-葡寡糖酶产品中外切酶组分含量高，会将目的产物水解为葡萄糖。因此，为了提高内切酶组分的相对含量，又对β-1,3-葡聚糖酶进行了富集。经过超滤、DEAE-650M离子交换层析后的酶液纯化倍数为17.5，回收率为51.0%。使用富集后的酶液水解热凝胶，并优化水解条件，最终得到了聚合度范围为2-5的β-1,3-葡寡糖，寡糖总浓度为1.35g/L。本文还对寡糖诱导土豆幼苗抗早疫病和晚疫病的效果进行了研究，结果表明，寡糖对早疫病的抑制率达到了39.9%，对晚疫病的抑制率达到了59.8%。最后，本文对热凝胶水解得到的不同聚合度寡糖混合液进行了分离和鉴定。采用半制备HPLC分离热凝胶水解液，优化分离条件并手工收集洗脱峰，通过对收集的样品进行TLC（薄层层析）和ESI-MS分析，证明收集的样品较纯，分别为葡萄糖和DP2-10的葡寡糖。