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紫草科植物根部合成的红色萘醌类次生代谢产物--紫草宁及其衍生物不仅是一种天然的染料,而且具有多种药用价值,如抗菌、抗肿瘤、抗生育及抑制HIV病毒等。外源茉莉酸甲酯(MJ)对紫草细胞紫草宁合成具有促进作用,但对其调控机制还很不清楚。由于差异蛋白质组学研究可为两个或更多不同实验处理的实验样本提供详尽的、系统的功能机制信息,因此利用差异蛋白质组学的方法将有助于深入、系统的了解MJ对紫草宁合成的调控机制,并为MJ调控植物次生代谢的研究提供借鉴。
本研究采用差异蛋白质组学方法,研究了MJ对紫草宁合成的调控机制。硬紫草Y8(Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc)细胞预培养两天后,处理组细胞添加10μmol/L MJ处理一天,分别取对照、处理组细胞提取总蛋白。蛋白定量后进行电泳,研究其差异表达的蛋白。结果表明,在IPG4-7凝胶中可重复地分离检测、匹配上的蛋白质点680多个,并对得到的蛋白质图谱通过ImageMasterTM2D Platinum5.0 software软件包进行蛋白点的检测、配比和差异分析等。筛选了表达情况(vol%)具有显著性差异,且差异倍率达到1.5倍以上的蛋白点共74个,其中68个上调表达,6个下调表达。通过Mascort与现有蛋白质数据库(NCBInr)检索匹配,37个蛋白与蛋白数据库中已知功能蛋白匹配,37个蛋白与数据库中推测蛋白匹配,这其中包括6个功能未知蛋白。已知功能蛋白中有三个紫草黑暗诱导的蛋白(LeDI-1,LeDI-3,LeDI-5c);有三个与紫草宁合成相关重要的酶[甲戊二羟酸单酰辅酶 A还原酶(HMGR),肉桂酸-4-羟化酶(C4H)苯丙氨酸裂解酶(Phenylalanineammonia-lyase2(PAL-2))];两个与乙烯、多胺有关的重要蛋白S-Adenosylmethionine synthetase(SAMS),CTR1-like protein kinase;此外,一些抗病蛋白,泛素降解途径相关蛋白,蛋白质折叠或修饰蛋白,能量代谢相关蛋白,转录及转录后加工蛋白也被鉴定。经分析,外源MJ对紫草宁合成的调控可能通过调控紫草宁合成相关酶的蛋白表达,此外乙烯、多胺也可能协同参与MJ对紫草宁合成的调控。以上研究结果为深入了解MJ对紫草宁合成调控的机制提供了重要信息。